[發明專利]抗體、雜交瘤細胞株和檢測豬δ冠狀病毒的試劑盒

有效

• 申請號: 202110277976.3
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN113150134B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 李彬;汪偉;周金柱;郭容利;周俊明;范寶超;李基棕;趙永祥;李澧;朱雪蛟
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;G01N33/569
• 代理公司: 北京盛詢知識產權代理有限公司 11901
• 代理人: 莫兆忠

本發明提供抗體、雜交瘤細胞株和檢測豬δ冠狀病毒的試劑盒。所述抗體能特異性地識別并結合豬δ冠狀病毒的N蛋白，優選是單克隆抗體。本發明還提供分泌抗豬δ冠狀病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞株FL125?29，其被保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:C202131。本發明另外還提供基于雙抗體夾心法檢測豬δ冠狀病毒的ELISA定量檢測試劑盒。本發明的抗體與重組豬δ冠狀病毒N蛋白和天然豬δ冠狀病毒N蛋白均能發生很強的特異性反應，與其他病原的蛋白成分不發生交叉反應。本發明的試劑盒最低可檢出含量為0.5ng/mL的豬δ冠狀病毒N蛋白，能很好地應用于對豬δ冠狀病毒N蛋白進行定量檢測。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體涉及抗豬δ冠狀病毒的抗體、分泌抗豬δ冠狀病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞株和檢測豬δ冠狀病毒的試劑盒。

背景技術

豬δ冠狀病毒（Porcine?Deltacoronavirus，PDCoV）為δ冠狀病毒成員，是2012年新發現的一種感染豬的冠狀病毒，臨床特征是引起母豬和仔豬腹瀉癥狀，以嘔吐、水樣腹瀉、脫水和食欲下降為基本特征，發病仔豬中的死亡率為?30%~40%。

此前，對PDCoV病原的檢測多用常規的RT-PCR或RT-qPCR核酸檢測方法，操作繁雜、耗時長、成本較高、檢測過程易污染，且RT-PCR不能定量檢測、只能定性判斷，且不能高通量檢測。

發明內容

本發明一方面旨在提供抗豬δ冠狀病毒的抗體，所述抗豬δ冠狀病毒的抗體能特異性地識別并結合所述豬δ冠狀病毒的N蛋白。

優選地，所述抗豬δ冠狀病毒的抗體是單克隆抗體。

優選地，所述單克隆抗體由2021年2月2日保藏在位于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心、保藏編號為CCTCC?NO:C202131的雜交瘤細胞株FL125-29分泌。

本發明還提供分泌抗豬δ冠狀病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞株FL125-29，該細胞株于2021年2月2日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:C202131。

本發明還提供上述抗豬δ冠狀病毒的單克隆抗體在制備檢測豬δ冠狀病毒的試劑中的應用。

本發明還提供一種檢測豬δ冠狀病毒的試劑盒，其包括酶標板，所述酶標板的各反應孔內預包被有抗豬δ冠狀病毒的抗體，所述試劑盒還包括檢測抗體。

優選地，所述檢測抗體是抗豬δ冠狀病毒N蛋白的多克隆抗體。

優選地，所述抗豬δ冠狀病毒的抗體是由2021年2月2日保藏在位于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心、保藏編號為CCTCC?NO:C202131的雜交瘤細胞株FL125-29分泌的單克隆抗體。

優選地，所述檢測抗體選自兔抗豬δ冠狀病毒N蛋白的多克隆抗體或羊抗豬δ冠狀病毒N蛋白的多克隆抗體。

優選地，所述試劑盒還包括酶標抗體工作液、標準品凍干粉、樣品處理液、顯色劑、終止液和洗滌液。

本發明提供的抗豬δ冠狀病毒的抗體與重組豬δ冠狀病毒N蛋白和臨床病料中的天然豬δ冠狀病毒N蛋白均能發生很強的特異性反應，而與其他病原的蛋白成分不發生交叉反應。基于該抗豬δ冠狀病毒的抗體制備的試劑盒最低可檢出含量為0.5?ng/mL的豬δ冠狀病毒N蛋白，能很好地應用于對被檢樣品中豬δ冠狀病毒N蛋白進行定量檢測，進而反映出被檢樣品中豬δ冠狀病毒的水平。

本發明所制備的試劑盒具有特異性好、靈敏度高、重復性好、穩定性好，操作簡便、快速等優點，適合用于高通量臨床病原診斷、弱毒活疫苗的質量控制等應用實踐，對豬δ冠狀病毒的防控具有重要意義。

序列表

110?江蘇省農業科學院

120?抗體、雜交瘤細胞株和檢測豬δ冠狀病毒的試劑盒

130?JAAS2021-1