[發明專利]一種磁珠法提取干血斑基因組DNA的試劑盒及提取方法

在審

• 申請號: 202110275943.5
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN113122534A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 韓典霖;胡佳佳;胡美麗;楊亮
• 申請（專利權）人: 濟凡生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 丁彥峰

本發明公開了一種磁珠法提取干血斑基因組DNA的試劑盒及提取方法，所述DNA提取試劑包括裂解液、磁珠以及磁珠結合液；其中，所述磁珠結合液中，硫氰酸胍質量濃度為1?10M/L、Tris質量濃度為10?100mM/L、EDTA的質量濃度為10?100mM/L、Triton X?100的體積分數為2％；或所述結合液中，硫氰酸胍的質量濃度為1?10M/L、Tris的質量濃度為10?100mM/L、EDTA的質量濃度為10?100mM/L、吐溫20的體積分數為1.5％。所述磁珠采用硅羥基磁珠。本發明的干血斑基因組核酸試劑盒及提取方法能夠做到提取多種血液相關樣本，不僅是干血斑，還包括血液樣本，血凝塊樣本，血紗和富含血細胞的組織樣本；而且提取效力高、純度佳、產品穩定性強。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種磁珠法提取干血斑基因組DNA的試劑盒及提取方法。

背景技術

干血斑中提取基因組核酸是一種極為常見的需求，比如嬰幼兒遺傳病篩查，親子鑒定，成人多種疾病的檢測，法醫偵查等，需要提取干血斑中淋巴細胞的基因組，通過對于基因組的分析，其結果對于臨床醫學疾病診斷及治療十分重要。目前，干血斑提取基因組DNA主要有柱膜法和磁珠法兩種，為了使整個試劑盒不含有毒物質，保證了操作人員的安全，其他方法如飽和酚-氯仿法，鹽析沉淀法已經基本不采用；此外，柱膜法提取不能用于機器，也不適用于自動法高通量操作，而且提取效力一般。

目前，干血斑提取基因組DNA的提取方法很難做到每次都能提到完整的基因組DNA，并且很難做到沒有碎片和拖尾現象，因此，亟需研發一種干血斑基因組DNA提取試劑、試劑盒，以提取片段完整、質量穩定、條帶整潔的基因組DNA，以來滿足企業客戶和研究所、各大高校和醫療機構相關人員的需求。

發明內容

為此，本發明提供一種磁珠法提取干血斑基因組DNA的試劑盒及提取方法。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

本發明實施例提供一種DNA提取試劑，所述DNA提取試劑包括裂解液、磁珠以及磁珠結合液；

其中，所述磁珠結合液中，硫氰酸胍質量濃度為1-10M/L、Tris質量濃度為10-100mM/L、EDTA的質量濃度為10-100mM/L、Triton X-100的體積分數為2％；

或所述結合液中，硫氰酸胍的質量濃度為1-10M/L、Tris的質量濃度為10-100mM/L、EDTA的質量濃度為10-100mM/L、吐溫20的體積分數為1.5％；

所述磁珠采用硅羥基磁珠。

優選的，所述DNA提取試劑包括漂洗液和洗脫液；

所述漂洗液包括第一漂洗液和第二漂洗液；

所述第一漂洗液中，PEG 6000 5-10％(w/v)、NaCl 20-50mmol/L，溶劑為無菌水；

所述第二漂洗液為75-80％的乙醇；

所述洗脫液為pH為8.0，1M/L Tris或RNase-free水。

優選的，所述裂解液中，異硫氰酸胍的摩爾濃度為0.5-5mol/L、SDS的濃度為0.1-5％、Tris-HCl緩沖液的濃度為10-80mmol/L、EDTA的濃度為0.5-10mmol/L、NaCl的濃度為5-50mmol/L、Triton X-100的體積分數為0.1-2.0％、吐溫20的體積分數為0.1-2.0％。

優選的，所述磁珠的粒徑為200-600nm。

本發明實施例還提供一種DNA提取試劑盒，所述DNA提取試劑盒包括上述所述的DNA提取試劑。

優選的，所述的DNA提取試劑盒還包括離心管、與磁力架配合使用。