[發明專利]一種西地那非信號通路基因檢測試劑盒及其檢測方法和應用

在審

• 申請號: 202110275827.3
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN112980942A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 李鐵鷹
• 申請（專利權）人: 湖南普昂生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851
• 代理公司: 湖南喬熹知識產權代理事務所(普通合伙) 43262
• 代理人: 安曼

本發明公開了一種西地那非信號通路基因檢測試劑盒及其檢測方法和應用，其中，所述檢測試劑盒對GNB3、NOS3、NOS1三個基因的多態性設計特異性擴增引物，用于熒光定量PCR檢測，所述試劑盒包括如下組分：GNB3反應液、NOS3反應液、NOS1反應液、陽性對照、空白對照和酶。本發明采用熒光定量PCR法對西地那非信號通路基因進行檢測，試劑盒可同時檢測3個核心位點，通過對核心位點GNB3(C825T)、NOS3(T?786C)、NOS1(C276T)的基因型檢測，可以較為直接地確定出樣本源對于NO信號通路增強能力的水平是屬于正常或較高，為臨床個性化用藥給出基因角度的建議。

技術領域

本發明涉及一種西地那非信號通路基因檢測試劑盒及其檢測方法和應用，屬于基因檢測領域。

背景技術

勃起功能障礙(ED)的臨床定義為不能達到并維持足夠的勃起以允許滿意的性交，其病因有器質性、心理性和混合性。雖然ED是一種沒有威脅性的障礙，但它可以影響身體和心理社會健康，對患者及其伴侶的生活質量有重大影響。ED的風險已被證明與糖尿病、肥胖、心血管疾病、高血壓和/或血脂異常等共病情況有關，同時也有可能是由于根治性前列腺切除術后的神經損傷。

一氧化氮(NO)是參與陰莖勃起的關鍵介質，該分子由l-精氨酸通過不同的NO合酶(NOS)產生，包括神經元(nNOS)、內皮(eNOS)和誘導NOS，eNOS和nNOS在勃起誘導作用中比其他介質占優勢。作用外周的口服藥物如西地那非等是目前適用范圍最廣的治療方法，西地那非是PDE5抑制劑，一種特異性磷酸二酯酶抑制劑，可增加細胞內環鳥苷單磷酸水平，增強NO信號通路，已經被用于治療ED。編碼eNOS、nNOS的基因多態性會影響對PDE-5抑制劑的反應。

研究表明，多個SNP位點都與西地那非的應答差異相關。神經型一氧化氮合酶(NOS1/nNOS)，NOS1基因rs2682826(C276T)位點的多態性與西地那非的療效相關。在前列腺切除術后的ED患者(PED)中，CT型和TT型與較好的應答相關；在臨床ED患者(CED)中，TT型與較好的應答相關。內皮一氧化氮合成酶(NOS3/eNOS)，主要功能是參與精氨酸和脯氨酸代謝，并催化生成一氧化氮(NO)。eNOS基因-786CT位點多態性影響內皮型一氧化氮合酶的轉錄活性，從而使得個體對西地那非的應答產生差異。一項針對118名ED患者的研究發現，C等位基因與術后ED患者對西地那非更好的應答反應相關。GNB3是G蛋白β3亞單位，在細胞膜和效應蛋白之間的信息傳遞過程中起介導作用。825CT多態性導致外顯子9中498-620位核苷酸被刪除，表現為截斷但具有功能性的剪接變異體GNB3，使得信號轉導功能增強，使用西地那非時，更容易發揮藥效。一項針對113例接受西地那非(25-100mg)治療的勃起功能障礙患者的研究表明，勃起應答率與GNB3基因C825T基因型顯著相關。在TT型患者中觀察到90.9％的有效率，而CC型和CT型患者的有效率分別為50.9％和48.9％。

隨著研究的深入，對于SNP位點與藥物代謝的應答差異之間的關系已經越來越清晰和明確，并且，這種關系可以有效地應用于基因篩查和個性化醫療方面。目前，還沒有利用檢測GNB3(C825T)、NOS3(T-786C)、NOS1(C276T)三個基因的多態性，來判斷臨床ED患者和前列腺切除術后的ED患者對西地那非等藥物的代謝能力，從而為個性化用藥給出一定的指導參考。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本發明的目的是以熒光定量PCR為基礎，獲得一種西地那非信號通路基因檢測試劑盒及其檢測方法和應用。

為實現上述發明目的之一，本發明采用的西地那非信號通路基因檢測試劑盒的技術方案如下：

本發明的試劑盒針對GNB3(C825T)、NOS3(T-786C)、NOS1(C276T)三個基因的多態性設計特異性擴增引物，用于熒光定量PCR檢測，試劑盒包括如下組分：GNB3反應液、NOS3反應液、NOS1反應液、陽性對照、空白對照和酶。

優選地，所述設計了大量特異性引物，如下表所示：