[發明專利]誘導氣道基底干細胞分化為支氣管肺泡干細胞的培養基和方法有效
| 申請號： | 202110273765.2 | 申請日： | 2021-03-15 |
| 公開（公告）號： | CN113025563B | 公開（公告）日： | 2022-12-02 |
| 發明（設計）人： | 聶怡初;蔣近軍;鄧文斌;麥揚;徐健;趙景新;蕭倩;謝芫 | 申請（專利權）人： | 中山大學·深圳 |
| 主分類號： | C12N5/074 | 分類號： | C12N5/074 |
| 代理公司： | 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100 | 代理人： | 李海恬 |
| 地址： | 518000 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 誘導 基底 干細胞 化為 支氣管 肺泡 培養基 方法 | ||
1.一種誘導氣道基底干細胞分化為SPC陽性細胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
細胞擴增：培養氣道基底干細胞，定期傳代；
初級誘導分化培養：取P3～P5代氣道基底干細胞置于Matrigel基質包被的培養皿中進行誘導分化培養，培養0.5～1.5天后，清洗細胞，更換培養基為初級誘導分化培養基，培養5～7天；
次級誘導分化培養：清洗經過初級誘導分化培養的細胞，更換培養基為次級誘導分化培養基，繼續培養5～7天，即得SPC陽性細胞；
所述初級誘導分化培養基包含以下濃度的組分：10μg/L FGF10，
10μg/L KGF，和3μM CHIR99021；
所述次級誘導分化培養基包含以下濃度的組分：10μg/L FGF10，
10μg/L KGF，3μM CHIR99021，45μM DAPT，和90μM IBMX；
所述初級誘導分化培養基的制備方法包括以下步驟：向SAGM培養基中加入FGF10、KGF和CHIR99021，混合均勻，即得；
所述次級誘導分化培養基的制備方法包括以下步驟：向SAGM培養基中加入FGF10、KGF、CHIR99021、DAPT和IBMX，混合均勻，即得。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞擴增步驟具體為：培養氣道基底干細胞，2～4天更換一次培養液，待細胞長滿后進行傳代。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述初級誘導分化培養步驟具體為：取P3～P5代氣道基底干細胞，放置于Matrigel基質包被的6孔培養板中進行誘導分化培養，培養密度為4～6×104個/孔，培養0.5～1.5天后，用DPBS清洗細胞，清洗完后添加所述初級誘導分化培養基，培養5～7天；
所述次級誘導分化培養步驟具體為：用DPBS清洗經過初級誘導分化培養的細胞，清洗完后添加所述次級誘導分化培養基，繼續培養5～7天，即得SPC陽性細胞。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中山大學·深圳，未經中山大學·深圳許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202110273765.2/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
