[發(fā)明專利]一種急性髓細(xì)胞性白血病的外周血TCR標(biāo)志物及其檢測試劑盒和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110273700.8
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號(hào): CN113109564A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張志新;卓越;楊鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 成都益安博生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/68;C07K14/725;A61P35/02
• 代理公司: 成都正華專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51229
• 代理人: 郭艷艷

本發(fā)明公開了一種急性髓細(xì)胞性白血病的外周血TCR標(biāo)志物及其檢測試劑盒和應(yīng)用。該標(biāo)志物包括序列為SEQ ID NO.1～100所示的蛋白中的至少一種。本發(fā)明基于高通量測序方法，只需要采取少量外周血，提取RNA，通過對樣本的處理建立免疫圖譜文庫，再經(jīng)過高通量測序和TCR數(shù)據(jù)分析，首先確定急性髓細(xì)胞性白血病外周血中特征性TCR序列，然后將待測樣本測試結(jié)果與該特征性TCR序列比對，從而確定是否患有急性髓細(xì)胞性白血病。本發(fā)明能夠同時(shí)比較巨大數(shù)量的急性髓細(xì)胞性白血病特異性TCR序列，相比單獨(dú)檢測一種或幾種標(biāo)記物，具有更高的特異性和準(zhǔn)確性，提高了診斷效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種急性髓細(xì)胞性白血病的外周血TCR標(biāo)志物及其檢測試劑盒和應(yīng)用。

背景技術(shù)

急性髓細(xì)胞性白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是髓系造血干/祖細(xì)胞惡性疾病。以骨髓與外周血中原始和幼稚髓性細(xì)胞異常增生為主要特征，臨床表現(xiàn)為貧血、出血(血小板減少)、感染和發(fā)熱、臟器浸潤、皮膚浸潤、代謝異常、牙齦增生等，多數(shù)病例病情急重，病情進(jìn)展迅速，自然病程僅有數(shù)周至數(shù)月，預(yù)后兇險(xiǎn)，如不及時(shí)治療常可危及生命。本病占小兒白血病的30％。在分子生物學(xué)改變及化療反應(yīng)方面兒童急性髓細(xì)胞性白血病與成人(50歲)相似。嬰幼兒的急性髓細(xì)胞性白血病比成人易發(fā)生髓外白血病。我國急性白血病比慢性白血病多見，其中急性髓細(xì)胞性白血病最多(1.62/10萬)。

目前針對急性髓細(xì)胞性白血病的診斷手段主要有血常規(guī)檢測、細(xì)胞化學(xué)檢查、免疫分型、染色體檢測、骨髓象檢測。

在血常規(guī)檢測中貧血和血小板減少極其常見(占75％～95％)，半數(shù)急性髓細(xì)胞性白血病患者白細(xì)胞數(shù)增高，多在10×10⁹/L～100×10⁹/L之間，部分病例甚至100×10⁹/L。部分患者白細(xì)胞數(shù)可正常，少數(shù)患者(常為M3型或老年病例)白細(xì)胞數(shù)4.0×10⁹/L。部分患者血紅蛋白低于正常值，甚至出現(xiàn)嚴(yán)重貧血，網(wǎng)織紅細(xì)胞常減少。血小板數(shù)多數(shù)患者減少，少數(shù)正常或輕度增高。該種檢測根據(jù)患者情況不同結(jié)果可高可低且不能作為定性急性髓細(xì)胞性白血病的檢測。

急性髓細(xì)胞性白血病的不同亞型其細(xì)胞化學(xué)染色特點(diǎn)不盡相同，因此急性髓細(xì)胞性白血病的細(xì)胞化學(xué)染色對該病的診斷十分重要。常用的細(xì)胞化學(xué)染色方法包括髓過氧化物酶染色(MPO)、蘇丹黑B染色(SBB)、氯醋酸AS-D萘酚酯酶染色(NAS-DCE)、α-丁酸萘酚酯酶染色(α-NBE)、α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)、過碘酸-雪夫染色(糖原染色、PAS)、酸陛磷酸酶染色(ACP)、堿性磷酸酶染色(NAP)、溶菌酶等方法。必要時(shí)可做酯酶雙染色和Phl(φ)小體等。該種檢測不能用于急性髓細(xì)胞性白血病的早期診斷。

免疫分型是根據(jù)急性髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞表達(dá)的相關(guān)抗原確定其系列來源，常用多參數(shù)流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，進(jìn)一步將急性髓細(xì)胞性白血病分為不同亞型。該檢測因受到相關(guān)抗原量的影響靈敏度不高。

80％～90％的兒童急性髓細(xì)胞性白血病伴有染色體異常。其中約半數(shù)急性髓細(xì)胞性白血病病例只以單獨(dú)核型異常出現(xiàn)，其余伴有附加異常。采用高分辨技術(shù)，核型異常發(fā)現(xiàn)率高達(dá)90％以上。急性髓細(xì)胞性白血病的染色體異常以結(jié)構(gòu)畸變?yōu)橹鳎哌_(dá)39種之多，某些特殊的結(jié)構(gòu)異常，如t(8；21)(q22；q22)、t(15；17)(q22；q21)和inv(16)(p13；q22)或t(16；16)(p13；q11)，與良好預(yù)后相關(guān)。該種檢測唯一性不足，不能用于早期診斷。

骨髓象檢測多數(shù)患者高度增生，正常造血細(xì)胞被白血病細(xì)胞取代；少數(shù)患者骨髓增生低下，但原始細(xì)胞仍在30％以上。如胞漿內(nèi)發(fā)現(xiàn)Auer小體，更有助于排除急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)而確診為急性髓細(xì)胞性白血病該種檢測根據(jù)患者情況不同結(jié)果可高可低且不能作為定性急性髓細(xì)胞性白血病的檢測。

除以上檢測之外，目前可用于診斷急性髓細(xì)胞性白血病的標(biāo)志物非常少。

發(fā)明內(nèi)容