[發明專利]一種殺鼠靈完全抗原及其制備方法在審
| 申請號： | 202110272828.2 | 申請日： | 2021-03-13 |
| 公開（公告）號： | CN113512107A | 公開（公告）日： | 2021-10-19 |
| 發明（設計）人： | 程建波;應劍波;謝偉宏;張建偉;孟凡偉 | 申請（專利權）人： | 杭州市公安局刑事科學技術研究所 |
| 主分類號： | C07K14/765 | 分類號： | C07K14/765;C07K1/107;C07K16/44 |
| 代理公司： | 鄭州睿途知識產權代理事務所(普通合伙) 41183 | 代理人： | 常娟 |
| 地址： | 310000 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 殺鼠靈 完全 抗原 及其 制備 方法 | ||
1.一種殺鼠靈完全抗原WFR-BSA，其特征在于，該完全抗原其由殺鼠靈與BSA偶聯制備而成，具體通過如下步驟制備獲得：
（一）物料預備
分別按照如下物料比例及要求，制備相關物料備用：
稱取Warfarin，用甲醇溶解配制成5mg/ml的溶液備用；
將BSA溶解到結合緩沖液中，制備成5mg/ml溶液備用；
將18mg的EDC、27mg的NHS加入到30ml的偶聯緩沖液中，充分溶解后制備成活化劑備用；
所述結合緩沖液，即，偶聯緩沖液，為pH=4.5-5.0的0.1M MES溶液；
（二）基團偶聯
基團偶聯時，采用直接偶聯方式，或者采用先半抗原、再全抗原方式制備；
采用直接偶聯方式制備完全抗原WFR-BSA時，按照如下步驟：
（1）將BSA溶液與活化劑混合，室溫反應1h，確保所有氨基已偶聯活化基團；
（2）將Warfarin甲醇溶液1ml與活化BSA溶液2ml，混合均勻，冷凍干燥過液；
（3）將步驟（2）的凍干的混合物置于偶聯儀內，氮氣氣氛條件下，偶聯反應；
（4）在步驟（3）的偶聯反應結束產物中，加入PBS溶液溶解；隨后，將溶解產物轉移至3KD超濾管內，離心、棄上清，去除未偶聯的小分子；最終所得即為截留的Warfarin-BSA偶聯物；
采用先半抗原、再全抗原方式制備完全抗原WFR-BSA時，具體步驟如下：
（1）將殺鼠靈改造為具有-COOH基團的半抗原WFR-COOH，并溶解到活化緩沖液，制備成濃度為3 mg/ml溶液；
所述活化緩沖液，為含有0.5M NaCl、且pH=6.0的0.1M MES溶液；
（2）將步驟（一）中所制備活化劑10ml加入到上述步驟（1）的5ml的半抗原WFR-COOH活化溶液中，37℃反應15min以活化基團；
反應結束后，加入2-巰基乙醇至終濃度20mM以淬滅EDC；
（3）加入步驟（1）中的BSA溶液4ml，37℃反應2小時，以將BSA與步驟（2）中活化后的WFR-COOH進行偶聯；
偶聯結束后，加入羥胺至終濃度10mM，以與未反應的NHS生成異羥肟酸；
（4）最后，采用脫鹽柱去除多余的淬滅試劑，最后所得即為偶聯BSA后的WFR-BSA。
2.權利要求1所述殺鼠靈完全抗原WFR-BSA在單克隆抗體制備中的應用，其特征在于，用于制備抗WFR的抗體。
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