[發明專利]一種新城疫病毒滴度的測定方法有效
| 申請號： | 202110272766.5 | 申請日： | 2021-03-13 |
| 公開（公告）號： | CN113049816B | 公開（公告）日： | 2023-08-22 |
| 發明（設計）人： | 羅玲;溫國元;邵華斌;商雨;汪宏才;羅青平;張蓉蓉;盧琴;張騰飛;張文婷 | 申請（專利權）人： | 湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/58 |
| 代理公司： | 武漢世躍專利代理事務所(普通合伙) 42273 | 代理人： | 鄔麗明 |
| 地址： | 430064 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 新城 疫病 毒滴度 測定 方法 | ||
1.一種新城疫病毒滴度的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)將多孔細胞培養板培養的細胞洗滌后，加入細胞維持液；
2)吸取處理好的不同來源的病毒液于多孔細胞培養板的首孔中，并梯度稀釋，同時設置不接種病毒的正常細胞為空白對照，培養觀察；
3)棄去培養基，進行固定、通透、封閉及洗滌；
4)避光同時加入一抗和二抗孵育，37℃搖床緩慢搖動30min，一抗為雞新城疫陽性血清，為1:100?1％BSA稀釋；二抗為FITC標記的兔抗雞lgG，1:200?1％BSA稀釋；
5)進行熒光檢測，計算病毒滴度。
2.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟1)中的細胞維持液為含2％體積濃度的雙抗的無血清DMEM，按如下配方進行配制：無血清DMEM100mL，雙抗2mL。
3.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟2)中的病毒液為細胞來源的病毒液處理時，處理方法為：將細胞增殖的病毒液反復凍融兩次，離心，取上清即可；步驟2)中的病毒液為組織來源的病毒液處理時，處理方法為：取腦、氣管和肺組織病料于含雙抗PBS中，勻漿機勻漿，反復凍融兩次，離心，取上清即可。
4.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟2)中的病毒液為雞胚尿囊液時，處理方法為：取雞胚尿囊液于5000r/min，5分鐘，取上清即可。
5.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟1)中的細胞為BHK-21細胞。
6.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，固定液為4％多聚甲醛，常溫固定10分鐘。
7.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，通透液為Triton-100。
8.如權利要求1所述的測定方法，其特征在于，所述病毒液的來源毒株為弱毒株。
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