[發明專利]一種珍珠貝肉來源ACE活性抑制肽及其制備篩選方法和應用

有效

• 申請號: 202110272087.8
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN113024633B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發明（設計）人: 尹浩;李姣;蘇繼磊;李艷群;丁文平;楊勇;尹團
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: C07K5/107
• 分類號: C07K5/107;C12P21/06;C07K1/34;C07K1/16
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了一種珍珠貝肉來源ACE活性抑制肽及其制備篩選方法和應用。以ACE抑制活性為導向，將酶解物經超濾、凝膠色譜法、高效液相色譜法等一系列方法分離純化，結合生物信息學篩選得到一個高純度的ACE抑制四肽，其氨基酸序列為：Phe?Arg?Val?Trp(FRVW)，采用固相合成法對四肽FRVW進行生物合成并測定活性，結果表明其對ACE的IC50值為18.34μM，是一個高活性小分子肽，將該肽應用于醫藥或者食品領域，具有極大的保健價值。本發明實現了海洋貝類產品珍珠貝高值化利用，為貝類產品深加工提供了可靠依據。

技術領域

本發明屬于ACE抑制肽技術領域，涉及一種珍珠貝肉來源ACE活性抑制肽及其制備篩選方法和應用。

背景技術

高血壓是心腦血管疾病發生發展的主要危險因素之一。而在高血壓的發病機理中，血管緊張素轉換酶(ACE)起著至關重要的作用，它可以催化血管緊張素I向血管緊張素II轉化，同時催化緩激肽的降解，從而升高血壓。因此，抑制血管緊張素轉化酶是治療高血壓的有效方法。臨床上常使用的ACE抑制劑包括卡托普利，依那普利和苯那普利。然而，這些合成藥物通常產生一些不良反應，例如服用期間出現咳嗽，失眠，皮疹和發燒等癥狀。因此，尋找高效低毒的替代治療品勢在必行。近年，各類蛋白諸如奶酪、大豆等的酶解產物已被報道具有ACE抑制功能。然而這些被開發的蛋白資源大多集中在陸地。我國海域面積廣闊，海洋生物種類繁多，蛋白資源豐富。并且，極端的海洋環境使得海洋生物與陸地生物相比具有更加獨特的蛋白序列。合浦珠母貝Pinctada fucata(P.fucata)是中國的一種海洋經濟貝類，其蛋白質含量高，有效利用卻不足。因此通過酶解實現珍珠貝蛋白的高值化利用，是海洋貝類產品深加工重要的一步。

發明內容

本發明的目的在于提供一種珍珠貝(合浦珠母貝)肉來源ACE活性抑制肽，其安全性高，具有產業應用價值。

本發明通過對合浦珠母貝肉酶解液多次分離純化，篩選出一種高活性的ACE活性抑制肽，所述的ACE活性抑制肽，其氨基酸序列為：Phe-Arg-Val-Trp(FRVW)，如SEQ ID NO.1所示。

以所述的ACE活性抑制肽為核心，任何對其進行的相應的調整或修飾都屬于本發明的保護范圍。

本發明的第二個目的是提供上述ACE活性抑制肽在制備血管緊張素轉換酶抑制劑中的應用。

本發明的第三個目的是提供一種血管緊張素轉換酶抑制劑，其含有上述ACE活性抑制肽作為活性成分。

所述的血管緊張素轉換酶抑制劑是治療高血壓的藥物。

本發明的第三個目的是提供一種ACE活性抑制肽的制備篩選方法，其是從合浦珠母貝肉中分離出來的。

具體包括以下步驟：

(1)珍珠貝肉酶解液的制備：取脫脂后的合浦珠母貝肉，加入蛋白酶酶解，酶解完后滅酶，然后離心過濾，得上清液；

(2)酶解液的分離純化：將上清液采用超濾管進行截留分段，取低分子段的組分經葡聚糖凝膠柱分離純化，分別測定各組分的ACE抑制率，最后將凝膠柱洗脫后具有最高ACE抑制活性的組分在RP-HPLC柱上分離制備，并測定各組分的ACE抑制活性；

(3)肽的鑒定：將經高效液相色譜分離后活性較高的組分進行鑒定，采用ESI/LC-MS/MS獲得其二級質譜數據，denovo測序后得到多肽序列；

(4)結合序列的ALC值及Pepsite2預測的P值對鑒定的多肽進行篩選；

(5)肽的合成及活性驗證：合成可靠且理論上具有高活性的肽，測定其ACE抑制率，驗證合成肽的活性。

所述的步驟(1)中的蛋白酶為堿性蛋白酶。

所述的步驟(2)的低分子段的組分是分子量小于2K Da的組分。