[發明專利]高產對氨基苯丙氨酸的重組大腸桿菌構建方法

有效

• 申請號: 202110271292.2
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN113151129B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 歐一新;胡曉婧;康前進
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/02;C12N9/10;C12N9/88;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/60;C12N15/70;C12P13/22;C12R1/19
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種合成對氨基苯丙氨酸的大腸桿菌工程菌的構建方法，其特征在于，在大腸桿菌中表達了PAPA合成途徑中所需的關鍵酶；所述關鍵酶包括4-氨基脫氧分支酸合成酶PapA、4-氨基脫氧分支酸變位酶PapB和4-氨基脫氧預苯酸脫水酶PapC；

所述關鍵酶選擇來自不同宿主的PAPA合成途徑，包括始旋鏈霉菌Streptomyces pristinaespiralis的papB、papC基因以及谷氨酸棒狀桿菌Corynebacterium glutamicum的papA基因；

所述方法包括如下步驟：

S1、對所述關鍵酶基因進行大腸桿菌密碼子優化及全合成；得到核苷酸序列依次分別如SEQ ID No.4所示的SppapBC基因、如SEQ ID No.9所示的CgpapA基因；

S2、構建含有CgpapA-SppapBC基因的質粒，導入大腸桿菌MG1655 (DE3)，獲得重組菌株；

S3、對重組菌株進行基因工程改造，敲除分支酸變位酶/預苯酸脫水酶基因pheA、分支酸變位酶/預苯酸脫氫酶基因tyrA、鄰氨基苯甲酸合成酶基因trpE和4-氨基脫氧分支酸裂解酶基因pabC；

S4、在步驟S3得到的基因工程改造菌株中過表達3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶編碼基因aroG^fbr；aroG^fbr基因的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示。

2.一種根據權利要求1所述的合成對氨基苯丙氨酸的大腸桿菌工程菌的構建方法構建得到的大腸桿菌工程菌。

3.一株合成對氨基苯丙氨酸的大腸桿菌工程菌，所述工程菌為大腸桿菌（Escherichiacoli）HXJE72，保藏編號為CGMCC No.21810。

4.一種用于構建合成對氨基苯丙氨酸的大腸桿菌工程菌的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒為含有CgpapA和SppapBC基因的重組質粒；CgpapA基因序列如SEQ ID No.9所示，SppapBC基因序列如SEQ ID No.4所示。