[發(fā)明專利]檢測新型冠狀病毒中和抗體的試劑盒及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110270816.6
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN113049831B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王志新;曾濱
• 申請（專利權(quán)）人: 北京博暉創(chuàng)新生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/531
• 代理公司: 北京壹川鳴知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11765
• 代理人: 趙浩竹

本發(fā)明適用于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種檢測新型冠狀病毒中和抗體的試劑盒及其制備方法和應(yīng)用，該檢測新型冠狀病毒中和抗體的試劑盒包括酶標(biāo)板，所述酶標(biāo)板上固定有新冠病毒2019?nCov衣殼蛋白；所述酶標(biāo)板上的新冠病毒2019?nCov衣殼蛋白特異性結(jié)合有辣根過氧化物酶標(biāo)記的受體蛋白ACE?2。本發(fā)明通過將新冠病毒2019?nCov衣殼蛋白通過物理吸附的方法固定在酶標(biāo)板上，固定在酶標(biāo)板上的新冠病毒2019?nCov衣殼蛋白再與辣根過氧化物酶標(biāo)記的受體蛋白ACE?2特異性結(jié)合形成配體復(fù)合物，既增強(qiáng)了保護(hù)酶標(biāo)蛋白的活性的作用，同時也減少了酶標(biāo)蛋白的用量，而且縮減了操作步驟和檢測時間。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測新型冠狀病毒中和抗體的試劑盒及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒(2019-nCov病毒)嚴(yán)重威脅了人類生命和健康，其中和抗體可以起到保護(hù)作用。簡單、快速的檢測手段和方法是診斷、治療、預(yù)后、疫苗效果觀察的有效的方法。

2019新型冠狀病毒(SARS-CoV-2，2019-nCoV)是冠狀病毒科β屬的一個分型，是一種具有包膜的線性單股正鏈RNA病毒。2019-nCoV具有幾種結(jié)構(gòu)蛋白，其中的刺突蛋白(S)包含一個受體結(jié)合域(RBD)，負(fù)責(zé)識別細(xì)胞表面受體血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)。RBD蛋白與人ACE2受體會發(fā)生強(qiáng)烈作用，使病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞并進(jìn)行病毒復(fù)制。病毒感染后，會引發(fā)免疫反應(yīng)，在血液中產(chǎn)生可保護(hù)宿主、防止再次受到病毒感染的抗體，此抗體被稱為中和抗體。在新冠病毒感染后產(chǎn)生的抗體并非都是中和抗體，而僅中和抗體可以保護(hù)機(jī)體避免受到病毒侵害，因此，在臨床上對于新型冠狀病毒中和抗體的測定對于臨床診斷及預(yù)后具有重大意義。

當(dāng)前病毒中和檢測金標(biāo)準(zhǔn)是需要在專業(yè)的生物防護(hù)設(shè)施(三級生物安全實驗室，BSL3)中使用活病毒。該檢測方法不僅十分昂貴，具有生物安全風(fēng)險，而且很慢，通常需要3-5天才能拿到結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明實施例的目的在于提供一種檢測新型冠狀病毒中和抗體的試劑盒，旨在解決背景技術(shù)中提出的問題。

本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，檢測新型冠狀病毒中和抗體的試劑盒，包括酶標(biāo)板，所述酶標(biāo)板上固定有新冠病毒2019-nCov衣殼蛋白；所述酶標(biāo)板上的新冠病毒2019-nCov衣殼蛋白特異性結(jié)合有辣根過氧化物酶標(biāo)記的受體蛋白ACE-2。

作為本發(fā)明實施例的一個優(yōu)選方案，所述新冠病毒2019-nCov衣殼蛋白通過物理吸附的方法固定在所述酶標(biāo)板上。

本發(fā)明實施例的另一目的在于提供一種上述的檢測新型冠狀病毒中和抗體的試劑盒的制備方法，其包括以下步驟：

將緩沖液和新冠病毒2019-nCov衣殼蛋白進(jìn)行混合，配制得到包被液；

用包被液對酶標(biāo)板進(jìn)行包被處理后，再經(jīng)洗滌，得到固定有新冠病毒2019-nCov衣殼蛋白的酶標(biāo)板；

將高碘酸鈉溶液與辣根過氧化物酶溶液進(jìn)行避光混合后，再加入乙二醇進(jìn)行混合，得到混合液；

往混合液中添加受體蛋白ACE-2進(jìn)行混合，并添加緩沖液調(diào)整pH值后，再進(jìn)行透析處理，得到透析液；

往透析液中加入硼氫化鈉溶液進(jìn)行避光混合后，再進(jìn)行透析處理，得到得到辣根過氧化物酶標(biāo)記的受體蛋白ACE-2；

將辣根過氧化物酶標(biāo)記的受體蛋白ACE-2進(jìn)行稀釋，并加入到固定有新冠病毒2019-nCov衣殼蛋白的酶標(biāo)板中進(jìn)行二次包被處理后，再經(jīng)洗滌、封閉和干燥處理，得到所述試劑盒。

作為本發(fā)明實施例的另一個優(yōu)選方案，所述包被液中，新冠病毒2019-nCov衣殼蛋白的濃度為80～120ng/mL。

作為本發(fā)明實施例的另一個優(yōu)選方案，所述步驟中，包被處理的溫度為3～5℃。