[發明專利]一種病毒RNA釋放劑、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202110269093.8
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN113025686B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 賈春蕾;曹振龍;劉少卿;宋曉東
• 申請（專利權）人: 江蘇吉諾思美精準醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 南京中律知識產權代理事務所(普通合伙) 32341
• 代理人: 沈振濤

本發明公開了一種病毒RNA釋放劑、試劑盒及其應用，所述釋放劑包含0.01?0.05mmol/L的多果定，0.05％?0.5％(v/v)曲拉通，5?15mmol/L氯化鉀和0.1％?0.5％(v/v)的氫氧化鈉。相對于現有技術，本發明釋放劑配方中所應用試劑價格低廉，配制方法簡單，所含試劑不具有化學危險。本試劑能夠對病毒進行有效裂解，安全快速的進行核酸釋放，操作簡單，耗時短。釋放后的產物對下游實驗無抑制作用，不影響后續PCR等實驗的擴增效率。

技術領域

本發明屬于RNA提取技術領域，特別涉及一種病毒RNA釋放劑、試劑盒及其應用。

背景技術

核酸是脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的總稱，是由許多核苷酸單體聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質之一。核酸是一類生物聚合物，是所有已知生命形式必不可少的組成物質，是所有生物分子中最重要的物質，廣泛存在于所有動植物細胞、微生物體內。核酸由核苷酸組成，而核苷酸單體由五碳糖、磷酸基和含氮堿基組成。如果五碳糖是核糖，則形成的聚合物是RNA；如果五碳糖是脫氧核糖，則形成的聚合物是DNA。

核酸提取是現代分子生物學研究的必要的基礎技術，制備高質量核酸是后續研究成功與否的關鍵。例如，當下，全球針對新型冠狀病毒的核酸檢測，其前提條件就是對新型冠狀病毒顆粒內的核酸進行釋放或者提取，才能順利進行核酸檢測，進而達到疫情防控的要求。核酸提取的原則首先保證核酸一級結構的完整，其次要排除其它分子的污染。核酸的提取方法，有著悠久的歷史，且形成多種提取方法。針對脫氧核糖核酸(DNA)提取的方法，就包括SDS法、CTAB法、酶裂解法等以先先裂解釋放DNA后層析純化的經典方法，以及基于這些基礎的DNA提取方法延展優化而成的多種商業試劑盒，最主要的有柱提法、磁珠法等。針對核糖核酸(RNA)的提取，例如提取新型冠狀病毒的RNA，經典方法有Trizol法，以及柱提法、磁珠法等商業試劑盒。

然而，上述核酸提取技術或者試劑盒，雖然已被廣泛應用，但在應對本次新型冠狀病毒疫情方面，凸顯它們的不足之處：核酸提取時間長、過程復雜、易發生交叉污染等問題。上述情況，對核酸制備技術提出了新的需求和要求，就是核酸制備技術要便捷和快速。以湖南圣湘生物以先的國內多款核酸釋放劑應運而生，極大滿足了市場需求。

即便如此，現有核酸釋放劑對病毒核酸釋放效率偏低，導致核酸檢測應用的靈敏度有所下降。實際實驗結果證明，現有的核酸釋放劑配方中SDS比例稍有不妥，導致后續PCR實驗嚴重受到抑制。

發明內容

發明目的：針對現有技術中的缺陷，本發明提供了一種病毒RNA釋放劑及其應用，該釋放劑成本低廉，使用方便快捷，能夠提高核酸釋放效率，提取的產物對后續PCR反應無抑制作用，且對溫度沒有特殊要求。

技術方案：為達到上述發明目的，本發明采用如下技術方案：

一種病毒RNA釋放劑，所述釋放劑包含0.01-0.04mmol/L的多果定(十二烷基胍醋酸鹽)，0.05％-0.5％(v/v)曲拉通(Triton?X-100)，5-15mmol/L氯化鉀(KCl)，0.1％-0.5％(v/v)的氫氧化鈉。

優選，所述氫氧化鈉為濃度50％的氫氧化鈉水溶液。

所述釋放劑中，使用多果定代替傳統的胍鹽可以降低對下游實驗的抑制作用，能夠對樣本進行有效的裂解，釋放核酸。所述的曲拉通是一種途廣泛的非離子表面活性劑，使病毒外殼蛋白裂解以及核酸與蛋白的分離。所述的氯化鉀能夠提供鹽離子，破壞蛋白穩定性，增加釋放效率。所述的氫氧化鈉能夠使蛋白質變性。

優選，所述釋放劑包含0.02-0.03mmol/L的多果定，0.05％-0.1％(v/v)曲拉通，5-10mmol/L氯化鉀和0.1％-0.3％(v/v)的氫氧化鈉。