[發明專利]一種基于HPLC-MS/MS診斷泌尿結石的試劑盒和應用

有效

• 申請號: 202110268695.1
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN113030327B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 高飛;海云;谷云云;羅示齊
• 申請（專利權）人: 杭州度安醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72
• 代理公司: 杭州信義達專利代理事務所(普通合伙) 33305
• 代理人: 萬景旺

本發明公開了一種基于高效液相色譜?串聯質譜檢測受試者生物樣本中標志物組合含量的試劑盒，屬于泌尿結石標志物檢測領域。其中，所述試劑盒包括所述標志物組合的分離檢測試劑，所述標志物組合包括檸檬酸和異檸檬酸，進一步地，所述標志物組合還包括草酸和胱氨酸。利用本發明，可能實現檸檬酸含量的精準測定，可以進一步用于診斷受試者是否患有泌尿結石，或者用于預測受試者是否具有患泌尿結石風險，或者用于評估泌尿結石患者接受結石治療的效果，或者用于預測泌尿結石患者治療痊愈后是否具有復發風險，具有重大的臨床意義和巨大的經濟效益。

技術領域

本發明屬于泌尿結石標志物檢測領域，具體地，涉及一種基于高效液相色譜-串聯質譜(HPLC-MS/MS)診斷泌尿結石的試劑盒和應用。

背景技術

泌尿結石(Nephrolithiasis)是晶體物質在泌尿系統的異常聚積所致，為泌尿系統的常見病，嚴重可引起尿路感染、腹痛、腎積水、腎功能衰竭等。泌尿結石發病率高，中國南方地區發病率高達5-10％，且易復發，手術后患者生活質量低，對患者家庭和社會負擔巨大，很多患者在出現癥狀之后才會發現結石，無法在早期及時評價結石風險，且對于結石手術后治療效果的評估、尚缺乏有效檢測方式。結石復發率極高，因此，建立合適的風險評估模型及檢測手段，對結石患者治療效果進行評估、預測患者結石復發或者發生風險具有重要的現實意義。

傳統確定結石的方法通常是醫學影像如B超、X線或者CT檢測，患者檢查時須已經產生結石，因此，此方法并不能用于早期結石預測。在評估結石患者的治療效果方面也有一定滯后性。

近年來，生物標志物的出現，如尿中草酸、尿酸及鈣等物質，使預測結石發生及評估結石患者治療效果成為可能。然而，人體具有一個整體的代謝系統，結石產生受多種因素綜合影響，現有的生物標志物缺乏整體研究數據。

代謝組學是通過研究生物體的大范圍代謝物變化情況，綜合評價生物的狀況。目前代謝組學已經在多個人類疾病研究領域得到應用。然而在泌尿結石方面，尚缺乏此類綜合數據，因此以代謝組學方法對泌尿結石進行研究更具有現實意義。

發明內容

為了解決上述技術問題中的至少一個，發明人以代謝組學為基礎，綜合研究了中國泌尿結石患者與對照組人群代謝物，發現了有效的生物標志物，并進一步建立了有效生物標志物的絕對定量分析方法，旨在建立提供精準診斷泌尿結石的技術體系。為了實現這個目的，本發明采用的技術方案如下：

本發明第一方面提供一種基于高效液相色譜-串聯質譜檢測受試者生物樣本中標志物組合含量的試劑盒，所述試劑盒包括標志物組合的分離檢測試劑，其中，所述標志物組合包括檸檬酸和異檸檬酸。

檸檬酸作為草酸鈣的抑制劑，是一種重要的泌尿結石標志物。異檸檬酸和檸檬酸是同分異構體的內源性物質，其存在會影響泌尿結石的診斷結果。

在本發明的一些實施方案中，所述分離檢測試劑包括衍生試劑。在本發明的一些優選實施方案中，所述衍生試劑為C3-C6醇類。使用C3-C6醇類作為衍生試劑，可以進一步通過高效液相色譜-串聯質譜實現檸檬酸和異檸檬酸的分離，提高檢測或診斷準確度。

進一步地，所述標志物組合還包括草酸和胱氨酸。草酸和胱氨酸同樣是泌尿結石的重要標志物。將草酸和胱氨酸聯合起來進行檢測，可以進一步提高診斷的準確度。

在本發明的一些實施方案中，所述C3-C6醇類是指具有3～6個C原子的醇。利用醇類進行衍生，具有至少兩個方面的好處：一方面，由于其不是利用氨基來衍生，因此，氨基酸上的氨基不會對醇類衍生劑產生干擾，可同時實現對氨基酸如胱氨酸的衍生。另一方面，由于醇類不存在空間位阻，可將檸檬酸與異檸檬酸內部的羥基暴露出來，擴大因羥基位置差異而使檸檬酸與異檸檬酸與色譜填料之間作用力的差異，從而達到完全基線分離的目的。進一步的，C3-C6醇衍生化以后能夠提高整個分子在質譜中的響應，從而增加檢測的靈敏度和準確度。

在本發明的一些具體實施方案中，所述衍生試劑為正丁醇。