[發(fā)明專利]桑樹中類胡蘿卜素裂解雙加氧酶相關(guān)的基因及其原核表達(dá)

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• 申請日: 2021-03-11
• 公開（公告）號: CN112899293A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉丹;邱長玉;林強(qiáng);朱方容;朱光書;唐燕梅;崔秋英;韋偉;張朝華;李韜;盧德;石華月;陳芳;林強(qiáng)軒
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/70;C12N9/02;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/84
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11369
• 代理人: 鄧雪明

1.桑樹中與類胡蘿卜素裂解雙加氧酶相關(guān)的基因，其特征在于，選自下列六個(gè)核酸序列之一：

SEQ ID NO.1所示堿基序列；

或SEQ ID NO.2所示堿基序列；

或SEQ ID NO.3所示堿基序列；

或SEQ ID NO.4所示堿基序列；

或SEQ ID NO.5所示堿基序列；

或SEQ ID NO.6所示堿基序列所示。

2.桑樹中與類胡蘿卜素裂解雙加氧酶相關(guān)的基因的原核表達(dá)方法，其特征在于，具體步驟包括：

S1、獲得SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ IDNO.6任意一個(gè)堿基序列，及其對應(yīng)的全長編碼序列；

S2、將所得的全長編碼序列通過載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌，選取陽性克隆作為構(gòu)建好的原核表達(dá)載體；

S3、將構(gòu)建好的原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入菌株并挑取陽性單克隆，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得原核表達(dá)的種子菌。

3.如權(quán)利要求2所述的桑樹中與類胡蘿卜素裂解雙加氧酶相關(guān)的基因的原核表達(dá)方法，其特征在于，所述SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ IDNO.5、SEQ ID NO.6所示的堿基序列通過以下步驟獲得：

S1、以國際生物基因數(shù)據(jù)庫中已報(bào)道的類胡蘿卜素裂解雙加氧酶基因的氨基酸序列作為查詢參數(shù)，在川桑蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行氨基酸序列比對，得到10條候選氨基酸序列；

S2、將得到的10條候選氨基酸序列在國際生物基因數(shù)據(jù)庫保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測網(wǎng)站進(jìn)行預(yù)測，得到7條屬于類胡蘿卜素裂解雙加氧酶亞家族的候選氨基酸序列；

S3、以7條屬于類胡蘿卜素裂解雙加氧酶亞家族的候選氨基酸序列的mRNA為模板設(shè)計(jì)定量引物，并通過Real-time quantitative RT-PCR分析方法在川桑中鑒定得到6條類胡蘿卜素裂解雙加氧酶基因序列，即為對應(yīng)的SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的堿基序列。

4.如權(quán)利要求2所述的桑樹中與類胡蘿卜素裂解雙加氧酶相關(guān)的基因的原核表達(dá)方法，其特征在于，所述全長特異引物的序列如下所示：

Mn012507-F:5’-atggagctcggtaccATGGCGGAAGTGGCGTC-3’，

Mn012507-R:5’-caggtcgacaagcttgaattcGATATTCAGTTTGAGTCCGAGTA-3’；

Mn012508-F:5’-atggagctcggtaccATGGCCGAAATAGTGGATGTGAAT-3’，

Mn012508-R:5’-caggtcgacaagcttgaattcTAGGACACCATTCCCAACATCAA-3’；

Mn012509-F:5’-atggagctcggtaccATGGCGGAGAAGCCGAGC-3’，

Mn012509-R:5’-caggtcgacaagcttgaattcGAGTTTTGCTTGTTCTTGCAGTTG-3’；

Mn023189-F:5’-atggagctcggtaccATGGCTTCCTCTTTTTTGGCAC-3’，

Mn023189-R:5’-caggtcgacaagcttgaattcTCATGCCTGGTGAACCAAGTCC-3’；

Mn008739-F:5’-atggagctcggtaccATGCCACATCACGTCTCCAA-3’，

Mn008739-R:5’-caggtcgacaagcttgaattcCACCGAGACTGGTATGAAAGCT-3’；

Mn008741-F:5’-atggagctcggtaccATGGCATCATCGTATATGGCAT-3’，

Mn008741-R:5’-caggtcgacaagcttgaattcTGGTGAGATTGGTATGAAAGCT-3’。