[發(fā)明專利]一種植物疫霉菌熒光素酶標(biāo)記菌株的制備方法及其在植物疫病防控中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110263303.2
• 申請日: 2021-03-11
• 公開（公告）號: CN113174423A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董莎萌;陳漢;李鷙;黃杰;王源超
• 申請（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12Q1/66;C12Q1/02;C12N1/15;C12N15/80;C12R1/645
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;李曉峰

1.熒光素酶標(biāo)記的病原菌作為報(bào)告系統(tǒng)在篩選抗病資源或農(nóng)作物抗性中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，使用熒光素酶標(biāo)記的病原菌的游動孢子、菌絲、卵孢子或菌餅接種植物，侵染后添加熒光素酶底物，統(tǒng)計(jì)病斑長度或面積；以病斑長度或面積衡量農(nóng)作物抗性或不同類型潛在抗病資源對病原菌的抑制或促進(jìn)作用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗病資源為具有生物防治潛力的抗病基因或微生物菌株、化學(xué)農(nóng)藥或生物農(nóng)藥。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的病原菌為植物病原菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的植物病原菌為疫霉菌。

6.一種以熒光素酶標(biāo)記的病原菌為報(bào)告系統(tǒng)篩選抗病資源或農(nóng)作物抗性的方法，其特征在于，使用熒光素酶標(biāo)記的病原菌的游動孢子、菌絲、卵孢子或菌餅接種植物，侵染后添加熒光素酶底物，統(tǒng)計(jì)病斑長度或面積；以病斑長度或面積衡量農(nóng)作物抗性或不同類型潛在抗病資源對病原菌的抑制或促進(jìn)作用。

7.一種熒光素酶標(biāo)記的病原菌，其特征在于，該病原菌是將用于過表達(dá)熒光素酶的轉(zhuǎn)化載體轉(zhuǎn)入病原菌并進(jìn)行篩選獲得熒光素酶標(biāo)記的病原菌菌株；所述的轉(zhuǎn)化載體用于病原菌瞬時轉(zhuǎn)化或穩(wěn)定轉(zhuǎn)化，包含編碼熒光素酶的基因序列或密碼子優(yōu)化得到的熒光素酶的基因序列。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光素酶標(biāo)記的病原菌，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化載體的制備方法為：以如SEQ ID NO.1所示的熒光素酶基因?yàn)槟０澹萌鏢EQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的引物擴(kuò)增出目的片段；利用片段重組的方法，將目的片段連接至疫霉表達(dá)載體中，篩選陽性克隆作為用于過表達(dá)熒光素酶的轉(zhuǎn)化載體。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的熒光素酶標(biāo)記的病原菌，其特征在于，所述的病原菌為大豆疫霉或辣椒疫霉；所述熒光素酶標(biāo)記的病原菌的菌株為菌株P(guān)sLuc或菌株P(guān)cLuc，所述的菌株P(guān)sLuc分類命名為大豆疫霉(Phytophthora sojae)，于2020年11月11日保藏于中國普通微生物保藏管理中心，保藏編號為：CGMCC No.21049，所述的菌株P(guān)cLuc分類命名為辣椒疫霉(Phytophthora capsici)，于2020年11月11日保藏于中國普通微生物保藏管理中心，保藏編號為：CGMCC No.21048。

10.一種用于過表達(dá)熒光素酶的轉(zhuǎn)化載體，其特征在于，該轉(zhuǎn)化載體用于病原菌瞬時轉(zhuǎn)化或穩(wěn)定轉(zhuǎn)化，包含編碼熒光素酶的基因序列或密碼子優(yōu)化得到的熒光素酶的基因序列；優(yōu)選的，該轉(zhuǎn)化載體的制備方法為：以如SEQ ID NO.1所示的熒光素酶基因?yàn)槟０澹萌鏢EQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的引物擴(kuò)增出目的片段；利用片段重組的方法，將目的片段連接至疫霉表達(dá)載體中，篩選陽性克隆作為用于過表達(dá)熒光素酶的轉(zhuǎn)化載體。