[發明專利]一種重組的非洲豬瘟病毒J18L亞單位蛋白及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110262981.7
• 申請日: 2021-03-10
• 公開（公告）號: CN115074372A
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 張強;錢泓;吳有強;賈寶琴;徐玉蘭;聞雪
• 申請（專利權）人: 浙江海隆生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/34
• 分類號: C12N15/34;C12N15/62;C07K19/00;C12N15/70;A61K39/12;A61P31/20;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京乾誠五洲知識產權代理有限責任公司 11042
• 代理人: 付曉青;李廣文

1.一種OPTI-J18L核苷酸，其特征在于，所述OPTI-J18L核苷酸的序列如SEQ ID NO 1所示。

2.一種OPTI-TrxA-J18L核苷酸，其特征在于，所述OPTI-TrxA-J18L核苷酸的序列是在權利要求1所述的核苷酸序列的5’端插入TrxA伴侶蛋白的基因編碼序列，所述OPTI-TrxA-J18L蛋白的基因編碼序列如SEQ ID NO 3所示，所述TrxA伴侶蛋白的基因編碼序列如SEQID NO 5所示。

3.一種OPTI-TrxA-酶切位點-J18L核苷酸，其特征在于，所述OPTI-TrxA-酶切位點-J18L核苷酸的序列是在權利要求2所述的TrxA蛋白的基因編碼序列和權利要求1所述的OPTI-J18L核苷酸序列之間插入一種酶的酶切位點的基因編碼序列。

4.根據權利要求3所述的OPTI-TrxA-酶切位點-J18L核苷酸，其特征在于，所述酶的酶切位點的基因編碼序列為TEV酶的酶切位點的基因編碼序列，所述TEV酶的酶切位點的基因編碼序列如SEQ ID NO 6所示。

5.根據權利要求4所述的OPTI-TrxA-酶切位點-J18L核苷酸，其特征在于，在OPTI-TrxA-_TEV-J18L的核苷酸序列的5’端加入6個組氨酸的基因編碼序列；所述6個組氨酸的基因編碼序列如SEQ ID NO 7所示。

6.一種OPTI-TrxA-TEV-J18L融合蛋白，其特征在于，所述OPTI-TrxA-TEV-J18L融合蛋白的氨基酸序列是如權利要求2-5任一所述的核苷酸序列編碼的序列如SEQ ID NO 4所示。

7.根據權利要求6所述的OPTI-TrxA-TEV-J18L融合蛋白，其特征在于，在如SEQ IDNO.4所示的氨基酸序列的氨基末端或羧基末端連接有poly-His、FLAG、c-myc、HA和poly-Arg中的一種標簽。

8.一種可溶性表達非洲豬瘟J18L蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

1)將權利要求6-7任一所述的OPTI-TrxA-TEV-J18L融合蛋白基因克隆到原核表達載體中，得到含有非洲豬瘟病毒OPTI-TrxA-TEV-J18L融合蛋白編碼基因的重組質粒；

2)再將所述重組質粒轉化至大腸桿菌細胞中，得到重組表達OPTI-TrxA-TEV-J18L的大腸桿菌菌株；

3)將步驟2)得到的所述大腸桿菌菌株進行發酵培養，IPTG誘導后，得到含有可溶表達OPTI-TrxA-TEV-J18L融合蛋白的發酵后的大腸桿菌菌體；

4)回收步驟3)發酵后的大腸桿菌菌體破碎后的上清液，分離純化帶有標簽的OPTI-TrxA-TEV-J18L融合蛋白；

5)使用TEV酶對步驟4)中所述OPTI-TrxA-TEV-J18L融合蛋白進行酶切、透析后，使用鎳柱親和層析獲得非洲豬瘟得到J18L蛋白；以及

6)將步驟5)中所得的J18L蛋白和藥學上可以接受的佐劑按照一定比例混合，以得到非洲豬瘟J18L亞單位蛋白疫苗。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述原核表達載體選自pET30a、pBAD、pcold、pQE、pKK載體中的一種。

10.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述大腸桿菌菌株選自BL21(DE3)、BL21 star(DE3)、arcticexpress、C41(DE3)、C43(DE3)菌株中的一種。

11.一種如權利要求1-10任一權利要求所述的制備非洲豬瘟J18L蛋白和非洲豬瘟J18L亞單位疫苗的診斷試劑中的應用。