[發明專利]一種臍帶間充質干細胞的培養方法及其應用

在審

• 申請號: 202110262200.4
• 申請日: 2021-03-10
• 公開（公告）號: CN113025568A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 何潔;潘興華;王金祥;趙晶;朱向情;蔡學敏;龐榮清
• 申請（專利權）人: 云南圣衍干細胞技術開發應用股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 昆明金科智誠知識產權代理事務所(普通合伙) 53216
• 代理人: 胡亞蘭

1.一種臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、準備培養瓶、鑷子、剪刀，并對器材進行消毒處理；

S2、取出臍帶備用，對臍帶進行清洗，去除血跡，將臍帶放入到酒精中對臍帶進行浸泡，時間為30-40min，結束后將臍帶進行取出，用剪刀進行剪碎，形成組織塊，將剪碎的臍帶放入到0.9％的氯化鈉溶液中進行繼續清洗，直至清洗液為清亮為止；

S3、將清洗之后的組織塊進行靜置45-50min，去除上清液；

S4、將組織塊加入到5-7倍的0.25％胰酶液中，在溫度為37攝氏度下消化35-45min，每隔6-8min進行震蕩一次，對細胞進行分離，靜置6-8min，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中，進行離心處理，結束后加入3-4ml的細胞生長液；

S5、進行營養液的配置，采用去離子水、FBS、細胞因子混合而成，將混合好的營養液移至培養瓶中；

S6、取S5中的溶液50ml移至培養瓶中，放置到37攝氏度的環境下進行培育，同時控制空氣的濃度為95％二氧化碳濃度為5％。

2.根據權利要求1所述的一種臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，在進行消毒處理時包括以下步驟：

A1、將器材放入到蒸汽高壓鍋中，使高壓鍋的溫度控制為65-70攝氏度，時間為5-8min；

A2、將溫度上升到90-100攝氏度，時間為3-4min；

A3、將溫度上升到122-128攝氏度，時間為15-20min。

3.根據權利要求1所述的一種臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于,在進行離心處理時包括以下步驟：

B1、將離心管置于離心機上，控制離心機的轉速為1000r/min，離心的時間為8-10min，去除上清液；

B2、加入平衡鹽酸溶液8ml，沖散細胞，再離心一次，去除上清液。

4.根據權利要求1所述的一種臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，在對臍帶進行剪碎時，保證組織塊的體積為0.8-1立方毫米。

5.根據權利要求1所述的一種臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，在對臍帶進行清洗時，采用37攝氏度的濃度為0.9％的氯化鈉溶液進行沖洗。

6.根據權利要求1所述的一種臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，采用的酒精濃度為75％。

7.根據權利要求1所述的一種臍帶間充質干細胞的培養方法，其特征在于，在去懸液到離心管中時，包括以下步驟：

C1、在離心管的上方綁上0.22um濾膜過濾；

C2、將懸液進行取出，使懸液穿過濾膜，對懸液進行過濾；

C3、過濾結束后，將濾膜進行取下。

8.根據權利要求1-7任一項所述的一種臍帶間充質干細胞的應用，其特征在于，將培育出來的干細胞用于生產組織和細胞。