[發(fā)明專利]克羅恩病易感基因的早篩方法及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110261808.5
• 申請(qǐng)日: 2021-03-10
• 公開（公告）號(hào): CN112831558B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐力
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京科力丹迪生物醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 上海上谷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31342
• 代理人: 蔡繼清

本發(fā)明提供了克羅恩病易感基因的早篩方法及試劑盒，具體的本發(fā)明考慮了患病人群與健康人群基因譜的差異性，篩選出與克羅恩病易感相關(guān)基因的SNP位點(diǎn)的組合，利用核酸質(zhì)譜儀對(duì)克羅恩病相關(guān)的遺傳學(xué)標(biāo)識(shí)進(jìn)行廣泛(高通量檢測(cè)位點(diǎn)、高通量檢測(cè)樣本)篩查和檢驗(yàn)。通過本發(fā)明的方法檢出成功率高、技術(shù)重現(xiàn)性好、性價(jià)比高，可實(shí)現(xiàn)單個(gè)小樣本多基因的檢測(cè)，滿足小樣本最大化使用；本發(fā)明的方法具有高準(zhǔn)確性、高靈敏性的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，提高了檢測(cè)陽(yáng)性率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種用于克羅恩病易感基因的早篩方法及試劑盒。

背景技術(shù)

克羅恩病(Crohn's disease，CD)是一種原因不明的腸道炎癥性疾病，又叫做局限性回腸炎、局限性腸炎等，在胃腸道的任何部位均可發(fā)生，可能與感染、體液免疫和細(xì)胞免疫有一定關(guān)系。是一些易感體制(攜帶易感基因)的人在外界環(huán)境因素的刺激下發(fā)生的一種自身免疫異常的疾病，也是一種由多個(gè)基因共同參與的胃腸道慢性炎性肉芽腫性疾病。大量的信號(hào)通路研究證據(jù)表明相關(guān)基因位點(diǎn)與CD的遺傳易感性密切相關(guān)，在CD的發(fā)病中起重要作用，為CD今后發(fā)病機(jī)制的研究，及有關(guān)基因篩選治療奠定了理論基礎(chǔ)。

單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNPs)是一種遺傳標(biāo)記，是指基因組水平上由于單核苷酸的變異，而引起的DNA序列的多態(tài)性。在人群中的發(fā)生頻率大于1％，包括單堿基的轉(zhuǎn)換、顛倒以及單堿基的插入或缺失等形式表現(xiàn)，是一種新的遺傳標(biāo)志，可以為疾病的預(yù)測(cè)、診斷、治療以及新型藥物的研制提供可靠的有效的科學(xué)根據(jù)。

SNP在疾病基因定位中所發(fā)揮的作用主要包括：1.在疾病定位區(qū)域中尋找致病SNP，這種SNP的出現(xiàn)可能直接導(dǎo)致了基因轉(zhuǎn)錄水平上和翻譯水平上的變化，即改變了基因表達(dá)量或者基因產(chǎn)物蛋白質(zhì)的組成結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致某種疾病發(fā)生或使得個(gè)體對(duì)某種特殊的環(huán)境易感；2.SNP作為一個(gè)遺傳標(biāo)記，與疾病或表型緊密連鎖。近年來利用SNP預(yù)測(cè)疾病的發(fā)生發(fā)展已經(jīng)成為臨床和科研工作者的熱點(diǎn)，且在腫瘤和心腦血管等重大疾病預(yù)測(cè)上的應(yīng)用價(jià)值已初見端倪。

克羅恩病，其原因至今不明，可能與感染、免疫、遺傳有一定關(guān)系。該病主要累及小腸和結(jié)腸，引起貫穿腸壁各層增殖性病變，會(huì)侵犯腸系膜以及局部淋巴結(jié)，發(fā)病率約克羅恩病起病大多比較隱匿，從發(fā)病早期癥狀出現(xiàn)至確診往往需數(shù)月至數(shù)年。病程呈慢性，長(zhǎng)短不等的活動(dòng)期與緩解期交替，有終生復(fù)發(fā)傾向。少數(shù)急性起病，可表現(xiàn)為急腹癥，酷似急性闌尾炎或急性腸梗阻。克羅恩病的發(fā)生可能伴隨其他炎癥性腸病，它累及的消化道位置也比較廣，臨床上會(huì)結(jié)合血檢、大便檢測(cè)、小腸CT、磁共振檢測(cè)、結(jié)腸鏡和小腸鏡檢測(cè)共同進(jìn)行診斷，這繁瑣檢測(cè)過程給患者造成了極大的不便。臨床上可分早期(癥狀多不明顯，是本病診斷困難的重要原因之一)，活動(dòng)期(癥狀明顯)，緩解期(有效治療后癥狀好轉(zhuǎn))或慢性活動(dòng)性(多因?qū)λ幬镆蕾嚮虻挚梗委煵灰?guī)范所致)。病理學(xué)上可分為早期、活動(dòng)期、慢性炎癥期或消退期等。本病所處期不同，臨床表現(xiàn)差異巨大，早期沒癥狀，活動(dòng)期表現(xiàn)明顯，緩解期癥狀輕微。最新臨床研究表明，對(duì)克羅恩病的研究首次發(fā)現(xiàn)了一個(gè)遺傳標(biāo)記的存在，可以根據(jù)此遺傳標(biāo)記對(duì)不同患者實(shí)現(xiàn)個(gè)性化藥物治療。目前臨床尚未有十分有效的早期檢查方法，因此亟需建立一種高靈敏，經(jīng)濟(jì)，簡(jiǎn)單的分子遺傳標(biāo)記篩查方法，通過克羅恩病易感基因的篩選提前診治，為早期克羅恩病患者帶來福音，為克羅恩病患者帶來個(gè)性化的治療與更好的預(yù)后。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種克羅恩病易感基因的早篩方法及試劑盒。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種克羅恩病易感基因的早篩試劑盒，所述試劑盒包括PCR擴(kuò)增引物對(duì)組，所述PCR擴(kuò)增引物對(duì)組包括特異性擴(kuò)增選自下組的SNP位點(diǎn)的引物對(duì)：rs72553867、rs4409764、rs3731772、rs17525495、rs13361189、rs9637876、rs10065172、rs2241880、rs6754677、rs2066844、rs2066847、rs7574865、rs1004819、rs1495465、rs11465788、rs4343、rs744166和rs11235604。