[發明專利]一種鑒定小圓胸小蠹昆蟲的雙重PCR引物、方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202110261087.8
• 申請日: 2021-03-10
• 公開（公告）號: CN113025724B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 王興民;黃衛東;桑文;陳曉勝
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

1.一種鑒定小圓胸小蠹昆蟲的雙重PCR引物，其特征在于，包含引物XdCOIF、XdCOIR和Xd16SF、Xd16SR，所述引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4所示。

2.權利要求1所述雙重PCR引物在檢測/鑒定小圓胸小蠹昆蟲的應用。

3.權利要求1所述雙重PCR引物在制備檢測/鑒定小圓胸小蠹昆蟲的試劑或試劑盒中的應用。

4.一種檢測/鑒定小圓胸小蠹昆蟲的雙重PCR方法，其特征在于，包含以下步驟：

S1.提取待測樣本基因組DNA；

S2.以步驟S1所得基因組DNA為模板，以權利要求1所述雙重PCR引物進行雙重PCR擴增，并對擴增產物進行電泳；

S3.將步驟S2中兩條條帶大小分別為413 bp和292 bp的條帶進行回收并測序，測序結果拼接、剪除兩端引物后，在NCBI上通過BLAST同源相似性比對鑒定其是否為小圓胸小蠹。

5.根據權利要求4所述方法，其特征在于，步驟S2中，雙重PCR的擴增體系為：PCR SuperMix 24 μL，10 μmol/L雙重PCR引物各1 μL，DNA模板1 μL，加無菌水補充至50 μL。

6.根據權利要求4所述方法，其特征在于，步驟S2中，雙重PCR擴增的反應程序為：94℃預變性3 min；94℃變性30 s，50℃退火30 s，68℃延伸2 min，35個循環；68℃最終延伸10min。

7.一種檢測/鑒定小圓胸小蠹昆蟲的試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述雙重PCR引物。

8.根據權利要求7所述試劑盒，其特征在于，還含有PCR擴增反應所需試劑。

9.權利要求7或8所述試劑盒在檢測/鑒定小圓胸小蠹昆蟲中的應用。