[發明專利]同時檢測血液樣本中醛固酮和腎素活性的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202110260233.5
• 申請日: 2021-03-10
• 公開（公告）號: CN113049697A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 馮振;景葉松;弭兆元
• 申請（專利權）人: 山東英盛生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 張曉鵬

1.一種同時檢測血液樣本中醛固酮和腎素活性的方法，其特征在于：包括樣品前處理步驟和進樣檢測步驟，其中，

樣品前處理包括如下步驟：向血液樣本中加入孵育緩沖液，孵育設定時間后，加入pH值調節劑，凈化后，得處理液，將處理液氮氣吹干，后采用流動相復溶，得待測液；所述pH值調節劑為甲酸、氨水或乙酸銨；

采用液相色譜串聯質譜方法進行檢測。

2.根據權利要求1所述的同時檢測血液樣本中醛固酮和腎素活性的方法，其特征在于：所述血液樣本為血漿或血清，優選為血清。

3.根據權利要求1所述的同時檢測血液樣本中醛固酮和腎素活性的方法，其特征在于：甲酸的濃度為0.1～2％，優選為1％，％為質量百分數；

氨水的濃度為0.5～8％，優選為5％，％為質量百分數；

乙酸銨的濃度為10～100mM，優選為50mM；

進一步的，血液樣本的pH值調節劑為10～100mM的乙酸銨。

4.根據權利要求1所述的同時檢測血液樣本中醛固酮和腎素活性的方法，其特征在于：所述孵育緩沖液為Tris-base與EDTA的混合液，其中的pH值調節劑為冰醋酸；

進一步的，所述孵育緩沖液的pH值為6.0-6.5；

在一些實施例中，孵育的時間為2.5-3.5h，孵育的溫度為36.5-37℃。

5.根據權利要求1所述的同時檢測血液樣本中醛固酮和腎素活性的方法，其特征在于：向血液樣本中加入pH值調節劑后，采用Biotage EVOLUTE EXPRESS ABN進行純化；

進一步的，將血液樣本上樣Biotage EVOLUTE EXPRESS ABN后，分別經由純水和10％乙腈淋洗后，采用純甲醇洗脫，獲得處理液；

在一些實施例中，還包括向血液樣本中加入內標溶液的步驟；

進一步的，所述內標溶液為含有ALD-D7和Ang I-13C15N，其濃度分別為1ng/mL和3ng/mL；

更進一步的，血液樣本、內標溶液和孵育緩沖液的體積比為8-12:8-12:5-7，優選為10:10:6；

進一步的，血液樣本與復溶溶液的體積比為4-6:2，優選為5:2。

6.根據權利要求1所述的同時檢測血液樣本中醛固酮和腎素活性的方法，其特征在于：液相色譜串聯質譜系統為YS EXACT 9050MD、YS EXACT 9900MD、島津LCMS-8050或AB4500MD，正離子電噴霧離子化的多離子反應監測；

在一些實施例中，液相色譜的條件為：流動相A為含2-10mM氟化銨HPLC級水；流動相B為純甲醇；梯度洗脫；

進一步的，液相色譜的色譜柱為C18脂溶性色譜柱子100mm×2.1mm，3.0μm，柱溫：40℃；

進一步的，梯度洗脫程序為：0-0.5min，流動相B的體積分數為30％；0.5-1min，流動相B的體積分數為50％；1-3min，流動相B的體積分數為60％；3-3.1min，流動相B的體積分數為95％；4-4.1min，流動相B的體積分數為30％；4.1-5min，流動相B的體積分數為30％。

7.根據權利要求1所述的同時檢測血液樣本中醛固酮和腎素活性的方法，其特征在于：質譜條件為：采用電噴霧ESI源，噴霧電壓4500V，離子傳輸管溫度300℃，蒸發溫度350℃，鞘氣40arb，輔氣5arb，采用MRM模式采集數據；

進一步的，MRM的質譜參數為：

Ang I：極性為Positive，母離子m/z，433.1；子離子m/z，647.5；定性子離子m/z，70.33；碰撞能量V，35.6；射頻電壓V，78.75；

ALD：極性為Positive，母離子m/z，為361.1；子離子m/z，322.5；定性子離子m/z，185.3；碰撞能量V，27.67；射頻電壓V，67.6。