[發(fā)明專利]一種檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針及其制備方法和應用

有效

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• 申請日: 2021-03-10
• 公開（公告）號: CN113024436B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設計）人: 陳光;孟令柱;趙光輝;李璐;許潔;王思妙
• 申請（專利權）人: 曲阜師范大學
• 主分類號: C07D209/12
• 分類號: C07D209/12;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 山東知圣律師事務所 37262
• 代理人: 陳輝

1.一種檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針，其結構式如式（1）所示：

式（1）。

2.一種檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將溶解了三氯氧磷的CH₂Cl₂溶液加入到冷卻的DMF和CH₂Cl₂形成的混合溶劑中，完成后繼續(xù)加入環(huán)己酮，并將得到的混合液加熱回流，完成后對得到的反應液冷卻結晶，得到的固體產物記為產物1，備用；

（2）將2,3,3-三甲基吲哚和碘乙烷溶解在甲苯中，將得到的混合物加熱回流，完成后將得到的反應液冷卻結晶，將得到的固體產物洗滌干凈，記為產物2，備用；

（3）將所述產物1、產物2、乙酸鈉溶解在乙酸酐中，將得到的混合物進行加熱反應，完成后將得到的反應液冷卻結晶，將得到的固體產物洗滌干凈后烘干，記為產物3，備用；

（4）將所述產物3和乙酸鈉溶于無水溶劑中，然后在保護氣氛中將得到的混合物加熱反應，完成后用飽和碘化鉀溶液洗滌得到的反應液，再用二氯甲烷萃取反應液，將得到的萃取液進行濃縮，然后對得到的固體產物進行純化，純化后產物記為產物4，備用；

（5）將4-溴甲基-3-硝基苯甲酸、二氯甲烷和DMF混合后冷卻，然后加入草酰氯，待氣體逸出停止，對反應液攪拌，反應完成后濃縮反應液，得4-溴甲基-3-硝基苯甲酰氯，備用；

（6）將所述產物4溶解在無水二氯甲烷中，然后在保護氣氛下先加入三乙胺，再加入溶解在無水二氯甲烷中的所述4-溴甲基-3-硝基苯甲酰氯，并使反應在低于室溫的冷卻環(huán)境中進行，待反應液由紅色變?yōu)榫G色后繼續(xù)在所述冷卻環(huán)境下靜置，然后將反應液恢復至室溫并靜置，反應完成后除去溶劑，對得到的固體產物進行純化，純化后產物記為產物5，備用；

（7）在二氯甲烷和在碳酸氫鈉存在下，于保護氣氛中用苯丁酸氮芥與所述產物5反應，反應結束后除去反應液中溶劑，對得到的固體產物進行純化，即得所述熒光分子探針。

3.根據(jù)權利要求2所述的檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中，加熱回流的溫度為20~40℃，時間為3~5h。

4.根據(jù)權利要求2所述的檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所述混合溶劑的溫度需要控制在零下15~10℃。

5.根據(jù)權利要求2所述的檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針的制備方法，其特征在于，所述CH₂Cl₂和DMF的體積比=1:1~3:1。

6.根據(jù)權利要求2所述的檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中，CH₂Cl₂溶液中三氯氧磷的濃度為0.3~0.9 μmol/L。

7.根據(jù)權利要求2所述的檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，2,3,3-三甲基吲哚和碘乙烷的摩爾比為5:9~2:3。

8.根據(jù)權利要求2所述的檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，加熱回流的溫度為80~100℃，時間為20h。

9.根據(jù)權利要求2所述的檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中，可以采用石油醚、DMF中的任意一種對結晶得到的固體產物進行洗滌。

10.根據(jù)權利要求2所述的檢測還原應激下DNA靶向的Cys熒光分子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中，產物1、產物2、乙酸鈉的添加比例依次序為1：3：0.5，摩爾比。