[發明專利]一種G-四鏈體核酸適配體與小分子相互作用的研究方法

有效

• 申請號: 202110258899.7
• 申請日: 2021-03-10
• 公開（公告）號: CN112986212B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 陸峰;柳艷;蔣承順;袁一凡;周青;王梁華;焦炳華
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍軍醫大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 王偉珍

1.一種G-四鏈體核酸適配體與小分子相互作用的研究方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟S1，用緩沖溶液分別配制G-四鏈體核酸適配體溶液以及小分子溶液，將所述G-四鏈體核酸適配體溶液和所述小分子溶液配制成一系列不同體積比的G-四鏈體核酸適配體-小分子混合溶液，然后將所述混合溶液進行變復性處理；

步驟S2，對經過所述變復性處理的一系列所述混合溶液分別進行表面增強拉曼光譜采集，得到相應的一系列表面增強拉曼光譜圖；

步驟S3，根據所述一系列表面增強拉曼光譜圖，分析G-四鏈體核酸適配體的多個特征峰的變化；

步驟S4，對預定拉曼位移范圍內的所述一系列表面增強拉曼光譜圖進行2DCOS計算，得到功率譜和異步譜；以及

步驟S5，通過分析所述功率譜和所述異步譜，得到所述G-四鏈體核酸適配體與小分子相互作用的基團、位點及結合過程，

其中，所述小分子為膝溝藻毒素，記作GTX1/4，

步驟S3中，所述特征峰為三個，分別為所述G-四鏈體核酸適配體的位于1487 cm^-1、1581cm^-1和1656 cm^-1處的特征峰，1487cm^-1為N7的Hoogsteen氫鍵，1581cm^-1為N2H的氫鍵，1656cm^-1為O6的Hoogsteen氫鍵，隨著GTX1/4比例的增加，1487cm^-1處的峰移到了1485cm^-1處，基于1487cm^-1附近的SERS譜帶表明了在G-四鏈體中dG(N7)和(N2H)之間形成了氫鍵,則表明GTX1/4與G-四鏈體核酸適配體是相互結合的；隨著GTX1/4比例的增加，1656cm^-1處的dG(C6＝O6)伸縮振動峰的強度也在逐漸增加，則表明GTX1/4與G-四鏈體核酸適配體的結合位點是在G-四鏈體平面上，

步驟S4中，所述預定拉曼位移范圍為步驟S3中所述多個特征峰的拉曼位移所在的范圍，

所述功率譜中，在1487cm^-1、1581cm^-1和1656cm^-1出現了較強的自相關峰，隨著GTX1/4比例的增加，其峰強度也在增加，相應地氫鍵的數量也在增加，則提示G四鏈體核酸適配體GTX1/4復合物的穩定性也在增加，

所述異步譜中，第一位置（1487cm^-1,1581cm^-1）、第二位置（1487cm^-1,1656cm^-1）和第三位置（1581cm^-1,1656cm^-1）處出現正的交叉峰，第四位置（1581cm^-1,1487cm^-1）、第五位置（1656cm^-1,1487 cm^-1）和第六位置（1656cm^-1,1581cm^-1）出現相應地的負的交叉峰，同時，結合功率譜可獲得G-四鏈體相關峰的變化順序前后依次為1487cm^-1、1581cm^-1和1656cm^-1，表明GTX1/4的加入確實引起了適配體的G-四鏈體構象的改變，使其SERS圖譜的特征峰發生了變化。

2.根據權利要求1所述的G-四鏈體核酸適配體與小分子相互作用的研究方法，其特征在于：

其中，步驟S1，所述變復性處理過程為：將所述混合溶液依次經過95℃水浴加熱10min、冰浴淬冷5min、室溫放置5min。

3.根據權利要求1所述的G-四鏈體核酸適配體與小分子相互作用的研究方法，其特征在于：

其中，步驟S1中，在所述G-四鏈體核酸適配體溶液中加入不同體積的所述小分子溶液，配置成體積比分別為1:0、1:0.2、1:0.5、1:0.75、1:1的所述G-四鏈體核酸適配體-小分子混合溶液，所述G-四鏈體核酸適配體的最終濃度均為100uM。