[發明專利]一種用于鑒別套細胞淋巴瘤的免疫組化多重染色試劑盒及染色程序

有效

• 申請號: 202110258813.0
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN112964877B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 牛銀銀;楊瀟燕;米貫勛;崔紅米;齊華;李三華;梁永波;劉文弟
• 申請（專利權）人: 河南賽諾特生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

本發明涉及一種用于鑒別套細胞淋巴瘤的免疫組化多重染色試劑盒及染色程序。本發明提供的試劑盒包括如下組分：過氧化物酶封閉劑、組合一抗試劑、組合二抗試劑、DAB顯色底物、DAB顯色緩沖液、快紅顯色劑、活化劑、快紅緩沖液、蘇木素復染液；所述組合一抗試劑包括鼠抗人k輕鏈單克隆抗體、兔抗人λ輕鏈單克隆抗體、兔抗人細胞周期蛋白D1單克隆抗體；所述組合二抗試劑包括HRP標記的抗鼠二抗聚合物、AP標記的抗兔二抗聚合物。該試劑盒能夠在一張組織樣本切片上同時呈現三個抗原靶標的表達情況，便于觀察靶標蛋白質的相互作用和共生定位，對組織樣本的需求量顯著降低；且該試劑盒能夠應用于自動化染色機，顯著提高準確度和可重復性，簡便高效。

技術領域

本發明屬于臨床病理檢測技術領域，具體涉及一種用于鑒別套細胞淋巴瘤的免疫組化多重染色試劑盒及染色程序。

背景技術

淋巴瘤是一種起源于淋巴結和結外淋巴組織的免疫系統惡性腫瘤。依據腫瘤的組織學特點，將淋巴瘤分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。依據腫瘤細胞起源的不同，非霍奇金淋巴瘤可分為B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤和NK細胞淋巴瘤，其中，套細胞淋巴瘤是B細胞淋巴瘤的一種亞型，該疾病惡性程度高、預后差。

K輕鏈(Kappa?Light?Chain)和λ輕鏈(Lambda?Light?China)可標記帶有輕鏈的B淋巴細胞、漿細胞和免疫母細胞，它們是免疫球蛋白上的兩條肽鏈。在正常情況下，輕鏈和重鏈的表達是平衡的，可形成完整的免疫球蛋白分子。在正常的淋巴結中，表達不同輕鏈的B細胞數K輕鏈：λ輕鏈為2:1，如果例K輕鏈：λ輕鏈比例大于3或者λ輕鏈：K輕鏈的比例大于2，或者單個指標的表達細胞量大于73％，則表示淋巴增生性失調。B細胞淋巴瘤中，K輕鏈蛋白和λ輕鏈蛋白常常成限制性表達，是B細胞單克隆增生的標志。但是，對于套細胞淋巴瘤而言，其早期病變常常有局限性，混雜多量反應性增生的淋巴細胞，其中含有較多的漿細胞，僅僅計算K輕鏈蛋白和λ輕鏈蛋白的比值來確定限制的輕鏈類型不太可靠，常常還需要參考其他指標，才能較準確地確定腫瘤細胞的準確位置和限制性輕鏈的類型。

目前，在套細胞淋巴瘤疾病的檢測主要依賴于免疫組織化學法，利用合適的免疫組化抗體來檢測抗原靶標，通過不同指標的表達情況來鑒別疾病的分型。該方法的特點是：①每個靶標的檢測需要一張組織切片；②應用常規免疫顯色試劑，顯示一種顏色，顯色為棕色，該方法的原理為：利用抗體與切片中的靶抗原形成抗原抗體復合物，再通過辣根過氧化物酶(HRP)標羊抗鼠/兔聚合物與抗原抗體復合物中的抗體結合，最后HRP催化二氨基聯苯胺(DAB)在抗原部位形成棕色沉淀，借助顯微鏡觀察其顏色變化，從而在抗原抗體結合部位確定組織、細胞的結構；③需要判讀多張切片的染色結果，綜合分析，得到病理診斷結果。該技術為傳統免疫組化的檢測方法，單個樣本的染色切片數量多，技術操作和病理醫師閱片的工作量大，對取材樣本的大小要求高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于鑒別套細胞淋巴瘤的免疫組化多重染色試劑盒及染色程序，該試劑盒能夠在一張組織切片上同時呈現三個抗原靶標的表達情況，便于病理醫生觀察靶標蛋白質的相互作用和共生定位，并避免微小組織樣本染色重復性差的問題。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明提供了一種免疫組化聯合彈性纖維雙重染色試劑盒，包括如下組分：過氧化物酶封閉劑、組合一抗試劑、組合二抗試劑、DAB顯色底物、DAB顯色緩沖液、快紅顯色劑、活化劑、快紅緩沖液、蘇木素復染液；所述組合一抗試劑包括鼠抗人k輕鏈單克隆抗體、鼠抗人λ輕鏈單克隆抗體、兔抗人細胞周期蛋白D1單克隆抗體；所述組合二抗試劑包括HRP標記的抗鼠二抗聚合物、AP標記的抗兔二抗聚合物。

優選的，所述組合一抗試劑中的鼠抗人k輕鏈單克隆抗體的克隆號為L1C1，抗體效價為：1:05-1:200。

優選的，所述組合一抗試劑中的鼠抗人λ輕鏈單克隆抗體的克隆號為EP172，抗體效價為：1:100-1:300。