[發(fā)明專利]一種大腦出血模型鼠的建立和評價方法

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• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN112972058A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設計）人: 劉真;杜永偉
• 申請（專利權）人: 劉真
• 主分類號: A61D7/00
• 分類號: A61D7/00;A61D1/00;A01K29/00
• 代理公司: 武漢菲翔知識產權代理有限公司 42284
• 代理人: 程玉紅

1.一種大腦出血模型鼠的建立和評價方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

A.準備工作；

選取SPF級大鼠，月齡均為3-9個月，體重為250-500g，按照大鼠腦立體定位圖譜確定大鼠右側尾殼核部位，對大鼠顱頂目標區(qū)域脫毛，將麻醉后備皮的大鼠固定于立體定位儀上；

B.腦出血模型建立；

采用超聲造影劑對目標大鼠靜脈注射，并結合超聲設備，利用超聲探頭于大鼠顱頂目標區(qū)域覆蓋，利用超聲造影劑形成血腦屏障開放，血液由血管內部向腦實質滲出；

C.生物模型評價；

針對蘇醒后的大鼠，按照其動作和行為評分，同時采用CT血管造影成像詳細檢查出血區(qū)域；

D.實驗動物分組和檢驗；

將實驗動物按照模型對照組、實驗組、3-MA抑制劑組和3-MA抑制劑式實驗組分類，實驗完成后即采用神經行為觀測、染色檢測和腦組織檢測法，驗證最終實驗結果。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種大腦出血模型鼠的建立和評價方法，其特征在于，所述步驟C中，大鼠造模后平均蘇醒時間約為2小時，后將大鼠放置于無蓋木質空箱子內，觀察其前爪形態(tài)及行走步態(tài)等體征，針對動作和行為的評分標準如下：

(1)大鼠與造模前并無異樣，可正常自由行走，即為無神經功能缺損，計0分；

(2)大鼠病灶對側前爪于行走或靜態(tài)時不能完全伸展，計1分；

(3)大鼠行走時向病灶對側轉圈或行走軌跡呈弧線狀，計2分；

(4)大鼠行走時肢體向病灶對側傾斜或傾倒，計3分；

(5)大鼠蘇醒后，有肢體活動但不能自發(fā)行走或有意識喪失等癥狀，計4分；

上述評分標準中＞0者判定為出現(xiàn)神經功能缺損體征，在步驟D中處死后取腦證實顱內血腫者視為造模成功，否則棄之不用，在同批大鼠中隨機抽樣重新入組。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種大腦出血模型鼠的建立和評價方法，其特征在于，所述步驟D中的檢驗方法具體包括如下步驟：

神經行為學觀察方法中，主要應用Berderson評分法，同時參考Longa肢體對稱實驗評分法；

染色檢測法主要為HE染色檢測腦組織病變法；

腦組織檢測法中包含有ELISA檢測腦組織和Westernblot法檢測腦組織。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種大腦出血模型鼠的建立和評價方法，其特征在于，所述步驟A中，大鼠需于實驗前1周內飼養(yǎng)觀察健康狀態(tài)，具有遺傳性腦出血的大鼠篩出并跳過步驟B，具有影響神經類疾病的大鼠篩出棄用。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種大腦出血模型鼠的建立和評價方法，其特征在于，所述步驟B中，需保持目標大鼠的體溫維持至35-36度，靜脈注射區(qū)域為大鼠尾部，同時在注射后10-15s后將其尾部置于45-50度水中浸泡。