[發(fā)明專利]茶樹自交育種的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110253218.8
• 申請(qǐng)日: 2021-03-08
• 公開（公告）號(hào): CN112997796A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韋朝領(lǐng);郭銳;劉升銳;朱俊彥;夏小波;密孝增;謝匯;張友澤;王朝霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01G17/00
• 分類號(hào): A01G17/00;A01H1/02;C12Q1/6886;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京市京大律師事務(wù)所 11321
• 代理人: 李洪群

1.茶樹自交育種的方法，其特征在于，所述方法包括：在茶樹開花前期，在茶園搭建防蟲網(wǎng)大棚，大棚內(nèi)只保留一個(gè)茶樹品種；在茶樹開花時(shí)期，在大棚內(nèi)配置蜜蜂，利用蜜蜂進(jìn)行自花授粉，并進(jìn)行自交后代的鑒定；

利用SSR和InDel共8個(gè)分子標(biāo)記對(duì)自交種進(jìn)行鑒定，用于擴(kuò)增SSR和InDel標(biāo)記的8對(duì)引物分別如SEQ ID NO：1和2、SEQ ID NO：3和4、SEQ ID NO：5和6、SEQ ID NO：7和8、SEQ IDNO：9和10、SEQ ID NO：11和12、SEQ ID NO：13和14、SEQ ID NO：15和16所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)自交親本的選擇：結(jié)合前期大田試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果選擇花期長(zhǎng)、結(jié)實(shí)率較高的品種作為育種目標(biāo)；

(2)防蟲網(wǎng)大棚的搭建：在茶樹開花前期，在茶園搭建一個(gè)防蟲網(wǎng)大棚，大棚內(nèi)只保留一個(gè)茶樹品種；

(3)田間管理：選擇好親本后，在春茶過后，不再對(duì)目標(biāo)茶樹進(jìn)行修剪，增施磷鉀肥；待大棚內(nèi)的茶樹開花前期，對(duì)對(duì)茶樹下部老葉爛葉進(jìn)行清理，并適時(shí)修剪；

(4)蜂傳授粉：在茶樹開花時(shí)期，在大棚內(nèi)放置蜂巢，利用蜜蜂進(jìn)行自花授粉；

(5)自交后代的鑒定：利用SSR和InDel分子標(biāo)記結(jié)合高通量毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)鑒定自交種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，茶樹同排株距為0.4-0.6米，相鄰親本的行距為1.2-1.5米。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，防蟲網(wǎng)大棚的長(zhǎng)度10米，寬度4.5米，高度2.5米，防蟲網(wǎng)的孔目為80目，防蟲網(wǎng)材質(zhì)為尼龍紗帳。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(4)中蜂巢放置時(shí)間為每年10月中旬，蜂巢中放置蜜蜂8000頭。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，大棚內(nèi)配置的蜂種為中華蜜蜂。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)包括：次年待茶果成熟發(fā)褐時(shí)，采摘茶果除皮后晾曬，后期播種于育苗圃，待茶籽發(fā)芽長(zhǎng)成幼苗時(shí)單棵移栽至資源圃，并利用SSR和InDel分子標(biāo)記結(jié)合高通量毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)鑒定自交種。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(5)包括如下子步驟：

1)利用改良的CTAB法提取親本和子代幼苗的基因組DNA；

2)以1)提取的DNA為模板，利用8對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

3)利用毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，根據(jù)電泳帶型判定子代是否為自交種。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，PCR反應(yīng)體系為：DNA模板1-1.2μL，10μM上、下游引物各0.5μL，2×Taq Plus Master Mix 5μL，用ddH₂O補(bǔ)齊至10μL；

PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4-95℃預(yù)變性3-5min；94℃變性30s，55-60℃退火30s，72℃延伸45s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，茶樹品種為舒茶早。