[發明專利]一種基于羥基磁珠的血漿游離DNA提取試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 202110249828.0
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN112941070A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 張若冰;郭誠;陳政;王云飛
• 申請（專利權）人: 山東驥圖生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 湖南楚墨知識產權代理有限公司 43268
• 代理人: 麥振聲

本發明涉及生物技術領域，尤其為一種基于羥基磁珠的血漿游離DNA提取試劑盒，包括試劑盒，所述試劑盒由蛋白酶K溶液、羥基磁珠、裂解液、裂解結合液、一次洗滌液、二次洗滌液和洗脫液組成，所述試劑盒中的磁珠為粒徑200?1000nm的羥基磁珠，濃度為10?100mg/ml；所述試劑盒中的裂解液中包含100?200g/L的十二烷基硫酸鈉，本發明通過設計磁珠吸附法試劑盒能夠適配高通量自動提取儀器，從而能夠達到更好的提取效果，成本低，更符合當下試劑盒發展的趨勢，同時針對磁珠吸附法試劑盒在提取效果上的要求，設計的試劑組合方案，實現了高提取效率、高提取量下限和優良的穩定性。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體為一種基于羥基磁珠的血漿游離DNA提取試劑盒及使用方法。

背景技術

沖壓近年來，隨著PCR檢測技術成熟，醫學界對人類DNA所表達遺傳信息的研究越發深入。隨之而來，越來越多通過DNA預測、診斷疾病的應用被開發出來，其中，人體血漿游離DNA因其獲取難度低，是極佳的研究與臨床應用樣本。通過讀取血漿游離DNA表達出的信息預知疾病也在臨床上得到了廣泛應用，例如：采集孕婦外周血，對其中含有的胎兒游離DNA進行識別分析從而預知新生兒父系遺傳病的無創產前診斷；采集病人血液，對游離DNA中腫瘤DNA進行識別分析從而判斷患者病情的腫瘤液體活檢等等。

而要得到可靠的臨床結論，血漿游離DNA的提取是一個很重要的環節。目前可靠提取血漿游離DNA的方法主要包括硅膜離心柱吸附法和磁珠吸附法，硅膜離心柱吸附方法原理是通過核酸吸附到二氧化硅表面，其它物質如化學物、糖類、蛋白等雜質用洗滌液快速洗去，然后用洗脫液洗脫核酸，該方法簡單快速，能有效的去除樣本中的各種雜質，獲得較純度較高的DNA，但成本較高，需要多步高速離心，更換離心管，沒有高通量的儀器配套，不適合臨床大規模樣本檢測。磁珠法提取核酸是近幾年才發展起來的核酸提取方法，其主要原理是在磁珠(主要為鐵氧體)表面通過共聚合和表面修飾等引入活性基團，這些活性基團有羥基，羧基，氨基、巰基等，制備成具有磁性的親和吸附劑，然后與核酸共同孵育后，通過疏水作用、靜電作用、離子吸附等原理，使核酸吸附到磁珠表面，經過簡單的洗滌，磁分離，得到表面結合有核酸的磁珠復合物，改變試劑pH值等條件可以把核酸從磁珠上洗脫下來,但是任然存在的缺陷，具體如下：

在臨床應用中，選擇試劑盒主要考慮試劑盒成本、使用成本、提取效果三方面，其中提取效果尤為重要，而提取效果主要通過提取效率、提取量、提取穩定性三方面進行評價；

市場上的硅膜離心柱吸附法試劑盒，其提取量、提取穩定性都很優秀，但在試劑盒成本和提取效率上，相對可配合儀器使用的磁珠法試劑盒有著明顯明顯的劣勢；

磁珠吸附法試劑盒因為其適配高通量自動提取儀器，從而可以達到更好的提取效果，同時本身成本相對較低，符合當下試劑盒發展的趨勢，是試劑盒廠家的發展方向，但在手動提取效果上與硅膜離心柱吸附法還存在一定差距。

綜上所述，本發明通過設計一種基于羥基磁珠的血漿游離DNA提取試劑盒及使用方法來解決存在的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于羥基磁珠的血漿游離DNA提取試劑盒及使用方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種基于羥基磁珠的血漿游離DNA提取試劑盒，包括試劑盒，所述試劑盒由蛋白酶K溶液、羥基磁珠、裂解液、裂解結合液、一次洗滌液、二次洗滌液和洗脫液組成，所述試劑盒中的磁珠為粒徑200-1000nm的羥基磁珠，濃度為10-100mg/ml；

所述試劑盒中的裂解液中包含100-200g/L的十二烷基硫酸鈉；

所述試劑盒中的裂解結合液中包含100-500g/L的異硫氰酸胍、1-10g/L的檸檬酸、2-20g/L的檸檬酸鈉、1-10g/L的氯化鈉、體積占比10%-50%的曲拉通X-100、體積占比10%-50%的異丙醇；