[發明專利]CAR-T細胞、其構建方法及其應用

在審

• 申請號: 202110249692.3
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN112980800A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 李建強;劉瑩;王琳;牛星
• 申請（專利權）人: 河北森朗生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/0783;C12N15/85;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 張羽

1.CAR-T細胞，其特征在于：所述CAR-T細胞是一種重組臍帶血來源的T細胞，所述CAR-T細胞不含有臍帶血來源的T細胞的CD7基因和TRAC基因，所述CAR-T細胞表達CAR，所述CAR特異性靶向于CD7。

2.根據權利要求1所述的CAR-T細胞，其特征在于：所述CAR含有抗CD7的單鏈抗體。

3.根據權利要求1所述的CAR-T細胞，其特征在于：所述CAR由抗CD7的單鏈抗體、4-1BB、CD3ζ和tEGFR連接而成。

4.根據權利要求1-3中任一所述的CAR-T細胞，其特征在于：所述CAR是氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.2的蛋白質。

5.根據權利要求1-4中任一所述的CAR-T細胞，其特征在于：所述CAR-T細胞按照權利要求6-8中任一所述的方法構建。

6.構建權利要求1-4中任一所述的CAR-T細胞的方法，其特征在于：所述方法包括：

(1)將CAR基因導入臍帶血來源的T細胞，獲得重組細胞；

(2)采用CRISPR/Cas9系統敲除所述重組細胞的CD7基因和TRAC基因，得到CD7基因和TRAC基因被敲除的重組細胞，所述CD7基因和TRAC基因被敲除的重組細胞為所述CAR-T細胞；

所述CAR基因編碼權利要求1-4中任一所述的CAR-T細胞中的CAR。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述CAR基因的編碼鏈的編碼序列是SEQID No.1中的第15位-2585位。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9系統包括特異性靶向于CD7基因的gRNA和特異性靶向于TRAC基因的gRNA，所述特異性靶向于CD7基因的gRNA的靶標核苷酸序列是5’-GGAGCAGGTGATGTTGACGG-3’，所述特異性靶向于TRAC基因的gRNA的靶標核苷酸序列是5’-GAGAATCAAAATCGGTGAAT-3’。

9.一種抗腫瘤藥物，其特征在于：所述抗腫瘤藥物包括權利要求1-5中任一所述的CAR-T細胞。

10.權利要求1-5中任一所述的CAR-T細胞或權利要求6-9中任一所述的方法在制備抗腫瘤藥物中的應用。