[發明專利]人源化ACE2基因改造小鼠胚胎干細胞模型制備方法及應用

有效

• 申請號: 202110245653.6
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN113355325B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 陳捷凱;孫驕楊;吳光明;吳凱昕;匡俊企;全雄志;郭琳
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90;A01K67/027
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 謝敏楠

1.一種sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的序列如SEQ?ID?NO:1或SEQ?ID?NO:2所示。

2.如權利要求1所述的sgRNA，其特征在于，合成如SEQ?ID?NO:2所述sgRNA的上下游引物序列分別如SEQ?ID?NO:4和SEQ?ID?NO:5所示。

3.如權利要求1所述的sgRNA，其特征在于，合成如SEQ?ID?NO:1所述sgRNA的上下游引物序列分別如SEQ?ID?NO:6和SEQ?ID?NO:7所示。

4.如權利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA靶向的基因為動物ACE2基因，用于定點切割ACE2基因。

5.如權利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA用于構建人源化動物模型。

6.如權利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的靶點位于所述的動物ACE2基因1號外顯子。

7.如權利要求6所述的sgRNA，其特征在于，所述靶點處于所述的動物ACE2基因5’UTR后140bp堿基范圍內。

8.如權利要求4-7任一所述的sgRNA，其特征在于，所述動物為哺乳動物。

9.如權利要求8所述的sgRNA，其特征在于，所述哺乳動物為嚙齒類動物。

10.如權利要求9所述的sgRNA，其特征在于，所述嚙齒類動物為鼠。

11.一種載體組合，其特征在于，所述載體組合包含：（1）含有如權利要求1-10任一所述的sgRNA的載體；（2）靶向載體，所述靶向載體包含5’同源臂、人源ACE2基因片段、SV40polyA序列和3’同源臂；所述的靶向載體靶向動物ACE2基因，所述動物ACE2基因含有與權利要求1-10任一所述的sgRNA相對應的靶點。

12.如權利要求11所述的載體組合，其特征在于，所述5’同源臂為與在目標基因組基因座處的5’靶序列同源的5’同源臂。

13.如權利要求12所述的載體組合，其特征在于，所述靶向載體用于將人源基因的CDS序列插入到動物基因的啟動子和5’UTR區域序列后，利用動物目的基因啟動子啟動人目的基因表達。

14.如權利要求12所述的載體組合，其特征在于，所述3’同源臂為與在目標基因組基因座處的3’靶序列同源的3’同源臂。

15.如權利要求14所述的載體組合，其特征在于，所述靶向載體還包含篩選標志PGK-Puro?。

16.如權利要求11所述的載體組合，其特征在于，所述動物為哺乳動物。

17.如權利要求16所述的載體組合，其特征在于，所述哺乳動物為嚙齒類動物。

18.如權利要求13所述的載體組合，其特征在于，所述動物為鼠。

19.一種編碼權利要求1-10任一所述的sgRNA的DNA分子。

20.一種細胞，其特征在于，包含權利要求1-10任一所述的sgRNA或權利要求11-18任一所述的靶向載體或權利要求19所述的DNA分子，所述細胞不能發育為動物個體，所述細胞不包括生殖細胞。