[發(fā)明專利]一種超靈敏無標(biāo)記快速檢測蓖麻毒素的光子晶體傳感材料及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110245280.2
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN113189025B
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 白家磊;吳瑾;彭媛;劉明珠;趙尊全;孫景然;高志賢;寧保安;王江;蓋雪嬌
• 申請（專利權(quán)）人: 軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院環(huán)境醫(yī)學(xué)與作業(yè)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/17
• 代理公司: 北京思創(chuàng)大成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

1.一種無標(biāo)記快速檢測蓖麻毒素的方法，包括以下步驟：向光子晶體傳感材料中加入緩沖液，將光纖光譜儀探頭垂直固定，待光子晶體傳感材料衍射峰穩(wěn)定后，用光纖光譜儀記錄衍射峰的強度和位置，向穩(wěn)定的傳感體系中加入含蓖麻毒素的待測樣品，30分鐘后用光纖光譜儀記錄其衍射光譜，根據(jù)衍射光譜的衍射峰值計算待測樣品中蓖麻毒素的含量，所述光子晶體傳感材料為連接有H₁序列的蛋白石SiO₂-AuNPs光子晶體，所述蛋白石SiO₂-AuNPs光子晶體由修飾金納米顆粒的二氧化硅微球懸浮液經(jīng)重力垂直沉降自組裝堆壘形成，所述H₁序列為：

5'-SH C6-GAC CTA CTT ATG AAA AAA AAA AAA TTA TAT CTA TCT-3'；

所述方法包括以下步驟：

S1. 利用Duff's法合成金納米顆粒

將去離子水、NaOH溶液和四羥甲基氯化磷混合均勻，然后快速加入四氯金酸溶液，在室溫條件下避光攪拌進行反應(yīng)，反應(yīng)完成后將反應(yīng)液避光保存；

S2. SiO₂-AuNPs微球的制備

將氨基化二氧化硅微球的水相懸浮液和金納米顆粒水溶液混合，超聲使溶液混合均勻，在室溫條件下避光攪拌進行反應(yīng)，將所得產(chǎn)物多次離心重懸，以除去未修飾在微球上的金納米顆粒，最后，將深酒紅色沉淀超聲分散于去離子水中，以獲得SiO₂-AuNPs懸浮液；

S3. 基于巰基化的H₁序列光子晶體傳感材料的制備

將1% SiO₂-AuNPs懸浮液加入聚苯乙烯24孔板中，每孔600μL，并置于60℃的真空干燥箱中干燥24小時，通過微球的重力沉降自組裝獲得堆壘在24孔板底部的光子晶體，將10μM修飾巰基的H₁序列在95℃的金屬浴中加熱5分鐘，然后逐漸恢復(fù)至室溫，使用PBS緩沖液將寡核苷酸序列稀釋，將50μL 10μM H₁序列滴加在24孔板SiO₂-AuNPs光子晶體，在恒溫培養(yǎng)箱中以37℃孵育12小時，通過Au-S鍵在光子晶體上修飾H₁序列，制備得到H₁寡核苷酸序列修飾的光子晶體傳感材料。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無標(biāo)記快速檢測蓖麻毒素的方法，其中，該方法還包括預(yù)先建立檢測蓖麻毒素的標(biāo)準(zhǔn)曲線：向權(quán)利要求1所述的光子晶體傳感材料中加入緩沖液，將光纖光譜儀探頭垂直固定，待光子晶體傳感材料衍射峰穩(wěn)定后，用光纖光譜儀記錄衍射峰的強度和位置，向穩(wěn)定的傳感體系中加入一系列不同濃度的蓖麻毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，30分鐘后用光纖光譜儀記錄其衍射光譜，根據(jù)衍射光譜的衍射峰值和對應(yīng)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。