[發(fā)明專利]促進(jìn)心臟損傷后修復(fù)的一類新型成纖維細(xì)胞及其標(biāo)識(shí)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110245082.6
• 申請(qǐng)日: 2021-03-05
• 公開（公告）號(hào): CN113046308A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周祥;張淑晨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/077
• 分類號(hào): C12N5/077;A61K35/33;A61P9/10;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 蘇州中合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32266
• 代理人: 劉召民

1.促進(jìn)心臟損傷后修復(fù)的一類新型成纖維細(xì)胞的標(biāo)識(shí)方法，包括：

1)構(gòu)建小鼠心肌梗死疾病模型；

2)采集組織樣本進(jìn)行單細(xì)胞ATAC-seq及后續(xù)數(shù)據(jù)的處理、校準(zhǔn)和聚類分析，得出差異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子；

3)免疫熒光定位兩組小鼠心臟組織中特異表達(dá)的蛋白或新型的成纖維細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)心臟損傷后修復(fù)的一類新型成纖維細(xì)胞的標(biāo)識(shí)方法，其特征在于，步驟1)中，選取SPF級(jí)8-10周齡C57BL/6J雄性黑鼠用于構(gòu)建小鼠心肌梗死疾病模型。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)心臟損傷后修復(fù)的一類新型成纖維細(xì)胞的標(biāo)識(shí)方法，其特征在于，步驟2)包括基于染色質(zhì)開放性富集峰或富集基序的細(xì)胞群聚類分析以及Gata5的足跡分析。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)心臟損傷后修復(fù)的一類新型成纖維細(xì)胞的標(biāo)識(shí)方法，其特征在于，步驟3)包括：冰凍組織切片用4％多聚甲醛固定10min，0.3％Triton X-100滲透10min，10％山羊血清封閉1h，Cola1和Gata5兩個(gè)非同一種屬來源的一抗同時(shí)4℃孵育過夜；玻片用0.3％Tween 20洗滌3次，相應(yīng)的二抗Goat Anti-Rabbit IgG HL和Goat Anti-Mouse IgG HL在室溫下孵育1h；用0.3％Tween 20洗滌3次后，將Isl1直標(biāo)一抗在室溫下孵育1h。

5.通過權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的促進(jìn)心臟損傷后修復(fù)的一類新型成纖維細(xì)胞的標(biāo)識(shí)方法獲得的成纖維細(xì)胞，其亞群表達(dá)成纖維細(xì)胞特征性基因Col1a1，同時(shí)還表達(dá)Gata5和Isl1。