[發(fā)明專利]STAR及其調(diào)控基因的用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110245020.5
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN113025700A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 苗向陽;解領(lǐng)麗;劉天義;馮卉;黃萬龍;李嬡
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113;C12N15/11;G01N33/68
• 代理公司: 北京千壹知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11940
• 代理人: 郭士磊

本發(fā)明涉及STAR及其調(diào)控基因的用途，具體涉及STAR及其調(diào)控基因MSTRG.9543在制備檢測卵巢發(fā)育成熟的試劑中的應(yīng)用。羊卵巢的發(fā)育和成熟是影響羊養(yǎng)殖場經(jīng)濟的重要因素，本申請通過高通量測序技術(shù)研究卵巢發(fā)育和成熟相關(guān)的基因，探索影響卵巢發(fā)育和成熟的分子機制，為畜牧生物育種提供研究基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞工程和基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及STAR及其調(diào)控基因的 用途。

背景技術(shù)

卵巢發(fā)育情況復(fù)雜，其中某一階段出現(xiàn)問題就可能引發(fā)相關(guān)疾病的產(chǎn)生，影 響生育與繁殖，且現(xiàn)階段發(fā)生卵巢相關(guān)疾病的概率變大，探究影響卵巢卵泡生長 發(fā)育等方面的機制也是非常重要的。已有研究表明許多非編碼RNA如miRNA 參與調(diào)控卵巢發(fā)育過程，影響動物的繁殖能力并與卵巢組織相關(guān)疾病有很大關(guān)系， 例如，miRNA-124被證實參與卵巢分化，在雌性動物性腺中低的SOX9水平與 性腺分化成卵巢有關(guān)，在性腺分化過程中miRNA-124上調(diào)表達，靶SOX9基因 表達下調(diào)。

非編碼RNA在開始被發(fā)現(xiàn)的一段時間內(nèi)一直被認(rèn)為是“轉(zhuǎn)錄噪音”，近年關(guān) 于非編碼RNA的研究逐漸增多，其功能也越來越多的被發(fā)現(xiàn)，例如lncRNA、 microRNA、tRNA、snoRNA等。已有研究發(fā)現(xiàn)lncRNA雖然不具有編碼蛋白質(zhì) 的性質(zhì)，但是能在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平影響基因發(fā)揮功能，其作為一類新的重要調(diào) 節(jié)因子廣泛參與各種生理和病理過程。對卵母細(xì)胞分化和成熟、卵巢內(nèi)各種細(xì)胞 發(fā)育、以及激素分泌和卵巢功能的發(fā)揮具有重要的調(diào)控作用。此外還與多囊卵巢 綜合征(PCOS)等卵巢發(fā)育相關(guān)疾病的產(chǎn)生和治療有關(guān)，因此lncRNA表達失 調(diào)常常導(dǎo)致多種疾病。

本申請選取中國本土湖羊品種為實驗對象，采用RNA-seq技術(shù)對卵巢組織中 的lncRNA進行測序分析，比較1、3、8三個月齡的湖羊卵巢組織中l(wèi)ncRNA的 差異表達情況，利用生物信息學(xué)方法篩選出各階段差異表達的lncRNA及其調(diào)控 基因，從而篩選出調(diào)控卵巢組織發(fā)育的lncRNA及其調(diào)控基因，探索lncRNA影 響卵巢發(fā)育的調(diào)控機制，為提高卵巢發(fā)育水平、增強繁殖能力和繁殖速度提供有 力依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，本發(fā)明的目的在于提供STAR在制備檢測 卵巢發(fā)育水平試劑中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，通過測序技術(shù)、核酸雜交技術(shù)或核酸擴增技術(shù)檢測STAR基因的表 達水平。

優(yōu)選的，核酸擴增技術(shù)采用一對特異性引物擴增STAR基因；核酸雜交包括 與STAR基因的核酸序列雜交的探針。

優(yōu)選的，通過免疫方法檢測STAR基因表達產(chǎn)物的表達水平。

優(yōu)選的，通過ELISA檢測試劑盒和/或膠體金檢測試劑盒檢測STAR基因達產(chǎn) 物的表達水平。

優(yōu)選的，卵巢為羊卵巢。

一種與羊卵巢發(fā)育相關(guān)的lncRNA，所述lncRNA為MSTRG.9543，序列與 SEQ IDNO.1具有90％以上序列同源性。

優(yōu)選的，MSTRG.9543序列與SEQ ID NO.1具有95％以上序列同源性；更 優(yōu)選的，長鏈非編碼RNA序列為SEQ ID NO.1。

MSTRG.9543用于制備檢測卵巢發(fā)育水平試劑中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，通過測序技術(shù)、核酸雜交技術(shù)或核酸擴增技術(shù)檢測MSTRG.9543基 因的表達水平。

優(yōu)選的，核酸擴增技術(shù)采用一對特異性引物擴增MSTRG.9543基因；核酸雜 交包括與STAR基因的核酸序列雜交的探針。

一種檢測羊卵巢發(fā)育的試劑，試劑包含用于核酸擴增的引物對，檢測 MSTRG.9543基因的表達水平。

優(yōu)選的，用于核酸擴增的引物對序列為SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。