[發明專利]一種利用分光光度法測定單寧提取物絡合蛋白質能力的方法

有效

• 申請號: 202110244310.8
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN113008819B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 張亮亮;張禾;徐曼;胡新宇;湯麗華;汪詠梅
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林產化學工業研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 馮慧

一種利用分光光度法測定單寧提取物絡合蛋白質能力的方法，步驟為：將單寧提取物用甲醇溶液配制成質量百分比濃度分別為0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mg/mL的系列濃度的單寧溶液；用pH4.9磷酸鹽緩沖液配制質量百分比濃度為1mg/mL的牛血清白蛋白溶液；向1mL比色皿中分別加入900μLBSA溶液和100μL不同濃度的單寧溶液，充分混合后，室溫靜置1min后，在510nm波長下測定反應溶液的吸光度值，以反應緩沖液為空白。以反應溶液中單寧濃度為橫坐標，吸光度值作為縱坐標得到線性模擬方程，由線性方程的斜率大小判斷單寧絡合蛋白質能力大小，斜率越大，單寧絡合蛋白質能力越強。

技術領域

本發明涉及一種利用分光光度法測定單寧提取物絡合蛋白質能力的方法，屬于化學分析技術領域。

背景技術

植物單寧(Vegetable tannin)又名植物多酚，是一類廣泛存在于植物體內的多元酚化合物，在維管植物中的含量僅次于纖維素、半纖維素和木質素，廣泛存在于植物的皮、根、葉、果中，含量可達20％，是森林資源綜合利用的主要對象之一。單寧主要用于鞣皮，制革業上稱為植物鞣劑。此外還用作選礦抑制劑、鍋爐水處理劑、鉆井泥漿稀釋劑和金屬表面防蝕劑，凝縮類栲膠也作為木工膠黏劑。植物單寧加工業是我國林產化工傳統產業的重要組成部分。

絡合蛋白質是植物單寧(多酚)最重要的化學特性。植物單寧能夠與蛋白質發生反應形成單寧-蛋白質絡合物從而降低蛋白質與多酚化合物的生物利用度。植物單寧與蛋白質之間可以通過氫鍵、疏水鍵、Pi-Pi堆積作用或靜電相互連接，形成絡合物。單寧絡合蛋白質在動物生理學、營養學和植物生態學及單寧的工業化利用上具有重要的意義。動物生產上經常利用單寧的收斂性，使得單寧提取物可作為飼料添加劑預防和治療仔豬腹瀉。單寧絡合蛋白質能力與其化學結構、聚合度(分子量)及蛋白質種類有關。由于不同植物來源的植物單寧提取物在單寧化學組成、聚合度、分子量上存在較大差異，導致其絡合蛋白質的能力也差異很大。在實際生產上經常需要測定不同植物來源的單寧提取物對蛋白質絡合能力大小，以考察其收斂性及在飼料添加劑上的應用效果。但目前，尚缺乏對單寧絡合蛋白質能力的快速測定方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用分光光度法測定單寧提取物絡合蛋白質能力的方法。

本發明的技術方案為：一種利用分光光度法測定單寧提取物絡合蛋白質能力的方法具體通過以下步驟制備得到：

(1)將單寧提取物用甲醇溶液配制成質量百分比濃度分別為0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mg/mL的系列濃度的單寧溶液；

(2)用磷酸鹽緩沖液配制質量百分比濃度為1mg/mL的牛血清白蛋白(BSA)溶液；

(3)向1mL比色皿中分別加入900μL BSA溶液和100μL系列濃度的單寧溶液，充分混合后，室溫靜置1min后，在510nm波長下測定反應溶液的吸光度值，以反應緩沖液為空白；

(4)以反應溶液中單寧濃度(mg/mL)為橫坐標，吸光度值作為縱坐標得到線性模擬方程，由線性方程的斜率大小判斷單寧絡合蛋白質能力大小，斜率越大，單寧絡合蛋白質能力越強。

步驟(1)中所述單寧提取物可來自于五倍子、塔拉、橡椀、高粱單寧、化香果、櫟木、板栗苞、毛楊梅樹皮、馬占相思樹皮、落葉松樹皮、余甘樹皮、黑荊樹樹皮、桉樹皮、紅樹植物、油茶果殼及各種植物的果實、果殼、樹皮等部位提取的單寧提取物。

步驟(2)中所述的磷酸鹽緩沖液pH值為4-5.5，最終優化為pH4.9。

本發明的有益效果：本發明技術操作簡單、便捷、對儀器設備要求低、穩定性好，可用于不同植物來源的單寧提取物絡合蛋白質能力的測定。

附圖說明

圖1五倍子單寧酸提取物絡合BSA滴定反應曲線。

圖2高粱單寧提取物絡合BSA滴定反應曲線。