[發明專利]lncRNA及其靶基因在羊卵巢發育中的應用

在審

• 申請號: 202110244229.X
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN113151263A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 苗向陽;解領麗;劉天義;馮卉;黃萬龍;李嬡
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/6888;G01N33/76
• 代理公司: 北京千壹知識產權代理事務所(普通合伙) 11940
• 代理人: 郭士磊

本發明涉及lncRNA及其靶基因在羊卵巢發育中的應用，具體涉及MSTRG.12709及其靶基因FSHR在制備檢測卵巢發育水平試劑中的應用。卵巢是哺乳動物重要的生殖器官，它的健康發育對于動物繁殖具有重要作用，本申請通過高通量測序技術研究卵巢發育相關的基因，探索影響卵巢發育和成熟的分子機制探索lncRNA影響卵巢發育的調控機制，為畜牧生物育種提供基礎。

技術領域

本發明屬于細胞工程和基因工程技術領域，具體涉及lncRNA及其靶基因在 羊卵巢發育中的應用。

背景技術

隨著基因組學和分子生物學的發展，發現了大量長非編碼RNA。許多lncRNA 在多個生物過程中發揮作用。但是對于lncRNA的作用在很大程度上是未知的， 仍有許多功能待于完善和挖掘，對于lncRNA在卵巢發育方面的研究更是局限。 李加宇等人通過qPCR發現lncRNA647、lncRNA147和lncRNA274在小鼠卵巢 組織中特異性高表達，并檢測出在小鼠不同發育階段和發情時期下，三種lncRNA 的表達量發生變化并具有一定規律。但目前關于lncRNA在羊卵巢發育方面的研 究鮮有報道。

卵巢是哺乳動物重要的生殖器官，也是配子和類固醇性激素的重要來源，它 的健康發育對于動物繁殖具有重要作用。卵巢發育情況復雜，各個過程必須正常 才能保證繁殖活動的順利進行。此外，卵巢是一個動態變化的器官，發育過程包 括卵母細胞和顆粒細胞的成熟，過程繁瑣復雜，除了有各個激素影響外還受各種 因子調節，例如成熟促進因子(MPF)、卵母細胞成熟抑制因子(OMI)、環腺苷 酸(cAMP)、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)、Ca+、生長分化因子(GDF)等。

為了探究卵巢發育的分子機制，本申請選取中國本土湖羊品種為實驗對象， 采用RNA-seq技術對卵巢組織中的lncRNA進行測序分析，比較1月齡、3月齡 的湖羊卵巢組織中lncRNA的差異表達情況，利用生物信息學方法篩選出各階段 差異表達的lncRNA及其調控基因，從而篩選出調控卵巢組織發育的lncRNA及 其調控基因，探索lncRNA影響卵巢發育的調控機制。

發明內容

本發明的目的在于提供一種與羊卵巢發育相關的lncRNA，所述lncRNA為MSTRG.12709，序列與SEQ ID NO.1具有90％以上序列同源性。

優選的，MSTRG.12709序列與SEQ ID NO.1具有95％以上序列同源性；更 優選的，長鏈非編碼RNA序列為SEQ ID NO.1。

MSTRG.12709及其靶基因用于制備檢測卵巢發育水平試劑中的應用。

優選的，通過測序技術、核酸雜交技術或核酸擴增技術檢測MSTRG.12709 及其靶基因的表達水平。

優選的，MSTRG.12709的靶基因為FSHR。

優選的，核酸擴增技術采用一對特異性引物擴增MSTRG.12709基因；核酸 雜交包括與FSHR基因的核酸序列雜交的探針。

優選的，通過免疫方法檢測FSHR基因表達產物的表達水平。

優選的，通過ELISA檢測試劑盒和/或膠體金檢測試劑盒檢測FSHR基因達產 物的表達水平。

優選的，卵巢為羊卵巢。

一種檢測羊卵巢發育的試劑，試劑包含用于核酸擴增的引物對，檢測MSTRG.12709基因的表達水平。

優選的，用于核酸擴增的引物對序列為SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。

優選的，試劑檢測的樣本為組織。

附圖說明

圖1為總RNA瓊脂糖凝膠電泳結果；

圖2為卵巢組織差異表達mRNA KEGG pathway富集分析(H1 vs H3)圖；