[發明專利]一種白及多糖改良那他霉素的方法及應用

有效

• 申請號: 202110240070.4
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN113786388B
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 趙桂秋;彭旭東;王謙;李翠;張冉冉
• 申請（專利權）人: 青島大學附屬醫院
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K9/08;A61K31/7048;A61K31/715;A61K47/55;A61K47/61;A61P31/10;A61P27/02;A61P29/00
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 于正河

1.一種白及多糖改良那他霉素的制備方法，其特征在于白及多糖改良那他霉素的制備方法包括5個工藝步驟：

(1)在每200ml磷酸鹽緩沖溶液中放入2～10g白及多糖，制成白及多糖溶液，再加入2～10g高碘酸鈉，并在室溫、避光條件下持續攪拌反應12小時，得到氧化白及多糖溶液；

(2)將2ml乙二醇加入步驟(1)制得的氧化白及多糖溶液中，攪拌5分鐘，以淬滅反應液中的高碘酸鈉，終止氧化反應；

(3)將200～800mg那他霉素溶于40ml甲醇，然后滴入到步驟(2)制得的反應液中，在室溫避光的條件下，持續攪拌12小時,步驟(2)和步驟(3)的反應式為：

(4)將200～350ml無水乙醇加入到步驟(3)制得的反應液中，充分攪拌析出白色沉淀，然后靜置4小時進行沉淀，抽濾析出的沉淀物，即含氧化白及多糖-那他霉素混合物；

(5)將步驟(4)析出的含氧化白及多糖-那他霉素混合物用蒸餾水進行透析3天，以除去殘留的高碘酸鈉、乙二醇、甲醇和乙醇，得到純化的氧化白及多糖-那他霉素，將純化的氧化白及多糖-那他霉素在-60℃條件下放置48小時凍干以獲得白色的氧化白及多糖-那他霉素凍干粉，并在4℃恒溫保存。

2.根據權利要求1所述的一種白及多糖改良那他霉素的制備方法，其特征在于所述的步驟(1)中，在每200ml磷酸鹽緩沖溶液中放入4g白及多糖，制成白及多糖溶液，再加入4g高碘酸鈉；在步驟(3)中將400mg那他霉素溶于40ml甲醇，在步驟(4)中將300ml無水乙醇加入到步驟(3)制得的反應液中。

3.一種氧化白及多糖-那他霉素滴眼液，其特征在于氧化白及多糖-那他霉素滴眼液的成分及其含量為：在每10ml磷酸鹽緩沖溶液中，加入的氧化白及多糖-那他霉素凍干粉的含量為100～8000ug。

4.根據權利要求3所述的一種氧化白及多糖-那他霉素滴眼液，其特征在于氧化白及多糖-那他霉素滴眼液的成分及其含量為：在每10ml磷酸鹽緩沖溶液中，加入的氧化白及多糖-那他霉素凍干粉的含量為1600ug；該滴眼液有水溶性、角膜穿透力、抗真菌、抗炎作用。

5.根據權利要求3或4所述的一種氧化白及多糖-那他霉素滴眼液，其特征在于將滴眼液進行抑制煙曲霉菌應用比較，那他霉素在8ug/ml時可以抑制90％以上的煙曲霉菌生長；氧化白及多糖-那他霉素在160ug/ml時可以抑制90％以上的煙曲霉菌生長。

6.根據權利要求3或4所述的一種氧化白及多糖-那他霉素滴眼液，其特征在于將滴眼液進行角膜上皮細胞及小鼠巨噬細胞毒性比較，那他霉素在16ug/ml時開始出現上皮細胞毒性，而氧化白及多糖-那他霉素在640ug/ml時開始出現上皮細胞毒性，且在160ug/ml時開始體現出促進上皮細胞生長的作用。

7.根據權利要求3或4所述的一種氧化白及多糖-那他霉素滴眼液，其特征在于將滴眼液進行小鼠巨噬細胞中的炎癥因子水平比較，氧化白及多糖-那他霉素具有抑制作用；進行小鼠煙曲霉菌性角膜炎模型中的炎癥因子水平比較，氧化白及多糖-那他霉素具有抑制作用。

8.根據權利要求3或4所述的一種氧化白及多糖-那他霉素滴眼液，其特征在于將滴眼液進小鼠巨噬細胞中的蛋白水平比較，氧化白及多糖-那他霉素降低了巨噬細胞中炎癥因子IL-1β、TNF-α、IL-6的蛋白水平。