[發(fā)明專利]鑒別梭鱸種群的引物及其鑒別方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110239111.8
• 申請(qǐng)日: 2021-03-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112813172B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魯翠云;鄭先虎;孫志鵬;曹頂臣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務(wù)所(普通合伙) 23210
• 代理人: 何強(qiáng)

鑒別梭鱸種群的引物及其鑒別方法，它涉及一種鑒別魚(yú)類種群的引物及其鑒別方法。鑒別梭鱸種群的引物由HLJSL041和HLJSL073兩組引物對(duì)組成。鑒別梭鱸種群的鑒別方法：一、提取基因組DNA；二、采用HLJSL041和HLJSL073兩組引物對(duì)對(duì)樣品DNA進(jìn)行SSR?PCR反應(yīng)；三、凝膠電泳，讀取基因型數(shù)據(jù)，區(qū)分和鑒別黑龍江水系的梭鱸種群。本發(fā)明從梭鱸的基因組序列中開(kāi)發(fā)出特異的微衛(wèi)星標(biāo)記，能夠鑒別和區(qū)分黑龍江水系的梭鱸種群，尤其能夠?qū)跆K里江梭鱸種群從黑龍江黑河江段、鴨綠江以及額爾齊斯河流域等主要梭鱸種群中區(qū)分出來(lái)，為梭鱸的繁育配組提供參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種鑒別魚(yú)類種群的引物及其鑒別方法。

背景技術(shù)

梭鱸(Sander lucioperca)隸屬于鱸形目(Perciformes)、鱸科(Percidae)、梭鱸屬。其體肥肉厚、肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)和氨基酸含量較高，有“淡水魚(yú)王”之稱。梭鱸原分布于歐洲咸海、黑海、里海及波羅的海水系的河流、湖泊。由于自然擴(kuò)散和人為移植，目前在歐洲大部分地區(qū)、中亞、北非以及我國(guó)新疆額爾齊斯河水系和黑龍江水系均有分布，已經(jīng)成為歐洲和中亞國(guó)家重要的淡水增養(yǎng)殖對(duì)象。我國(guó)多個(gè)省、市也將梭鱸作為重要的名特優(yōu)魚(yú)種進(jìn)行引進(jìn)養(yǎng)殖。

黑龍江水系是東亞地區(qū)流域面積最大的水系。流經(jīng)蒙古、俄羅斯以及中國(guó)的黑龍江省、內(nèi)蒙古自治區(qū)，流域內(nèi)降水量年分布極不均勻，且有長(zhǎng)達(dá)4-6個(gè)月的冰封期。黑龍江最大的支流是松花江，其他主要支流有呼瑪河、精奇里江(結(jié)雅河)、烏蘇里江等。

目前，我國(guó)已經(jīng)成功實(shí)現(xiàn)了梭鱸的人工繁殖，所用親魚(yú)多捕撈自額爾齊斯流域或黑龍江流域的河流、湖泊。據(jù)報(bào)道，梭鱸經(jīng)由興凱湖進(jìn)入了黑龍江流域。目前，在烏蘇里江、黑龍江以及鴨綠江均形成了梭鱸種群。梭鱸種源不清、種質(zhì)混雜的問(wèn)題利用形態(tài)特征難以解決，也不利于梭鱸人工繁殖、規(guī)模化制種、良種選育的開(kāi)展，鑒定不同來(lái)源的梭鱸種群對(duì)于開(kāi)展制種及選育具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)梭鱸種群種源不清、種質(zhì)混雜的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供鑒別梭鱸種群的引物及其鑒別方法。

鑒別梭鱸種群的引物由HLJSL041和HLJSL073兩組引物對(duì)組成；引物對(duì)HLJSL041的上游引物為5’-TGCCTAACACCTGAACACCA-3’，下游引物為5’-AAGGCAAACTGTGGGGTAGG-3’；引物對(duì)HLJSL073的上游引物為5’-AGAAATCGCCTCTGTGTTGT-3’，下游引物為5’-TTGCTGCTGTAACACTGTCA-3’。

鑒別梭鱸種群的鑒別方法：

一、提取基因組DNA；

二、采用HLJSL041和HLJSL073兩組引物對(duì)對(duì)樣品DNA進(jìn)行SSR-PCR反應(yīng)；

三、凝膠電泳，讀取基因型數(shù)據(jù)，區(qū)分和鑒別黑龍江水系的梭鱸種群。

進(jìn)一步的，采用無(wú)損傷方法采集提取樣品基因組DNA，從樣品個(gè)體可再生的鰭條組織剪取約0.1g，編號(hào)后放入75％酒精保存。

進(jìn)一步的，提取DNA過(guò)程嚴(yán)格控制消化時(shí)間為30min。

本發(fā)明引物所擴(kuò)增核心重復(fù)序列為(AGAT)_n。

本發(fā)明從梭鱸的基因組序列中開(kāi)發(fā)出特異的微衛(wèi)星標(biāo)記，能夠鑒別和區(qū)分黑龍江水系的梭鱸種群，尤其能夠?qū)跆K里江梭鱸種群從黑龍江黑河江段、鴨綠江以及額爾齊斯河流域等主要梭鱸種群中區(qū)分出來(lái)，為梭鱸的繁育配組提供參考。