[發(fā)明專利]一種靶向藥物的高通量篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110238982.8
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN113189078A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁重陽;徐抒平;戴璐
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 吉林省中玖專利代理有限公司 22219
• 代理人: 趙炳仁

本發(fā)明公開了一種靶向藥物的高通量篩選技術(shù)，將金屬納米粒子探針或磁珠探針分別與拉曼信號分子、靶蛋白或靶蛋白結(jié)合受體蛋白偶聯(lián)，并同時(shí)加入待篩選化合物中，孵育，最后，檢測拉曼信號，判斷所述待篩選化合物是否為靶向抑制劑，所述靶向抑制劑具有抑制靶蛋白相關(guān)生物學(xué)活性的特點(diǎn)。本發(fā)明首次將拉曼信號檢測應(yīng)用到靶向新藥篩選技術(shù)領(lǐng)域，并結(jié)合金屬納米粒子及磁珠，形成簡單靈敏的新藥篩選方法。同時(shí)，該方法測量干擾小，所需樣品量少，信號強(qiáng)且靈敏度高，同時(shí)操作簡便，整個(gè)檢測過程無需進(jìn)行清洗，為靶向藥物篩選途徑提供了新策略。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物篩選技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向藥物的高通量篩選方法。

背景技術(shù)

高通量藥物篩選是指以分子水平和細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)方法為基礎(chǔ)，以微板等形式作為實(shí)驗(yàn)工具載體，以自動(dòng)化操作系統(tǒng)執(zhí)行實(shí)驗(yàn)過程，以靈敏快速的檢測儀器采集實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)，以計(jì)算機(jī)對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，同一時(shí)間對大量樣品進(jìn)行檢測，并以相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫支持整個(gè)體系運(yùn)轉(zhuǎn)的技術(shù)體系。隨著越來越多新靶點(diǎn)的出現(xiàn)、合成化學(xué)的發(fā)展以及新檢測技術(shù)的應(yīng)用，也出現(xiàn)了許多高通量藥物篩選手段，如差式掃描熒光法(differentialscanning fluorimetry)，表面等離子共振法(surface plasmon resonance)，生物膜干涉法(bio-layer interferometry)，放大化學(xué)發(fā)光親和均相檢測(Alpha Screen)及熒光偏正法(fluorescence polarization)等。

在基于靶點(diǎn)的藥物篩選中，放大化學(xué)發(fā)光親和均相檢測(Amplified LuminescentProximity Homogeneous Assay Screen，ALPHA Screen)技術(shù)，由于其靈敏、實(shí)時(shí)、快速、方便等眾多優(yōu)點(diǎn)，是高通量篩選的常用手段之一。該技術(shù)是基于微珠的均相親和檢測方法。但是，ALPHA技術(shù)所得結(jié)果可能與胞內(nèi)真實(shí)狀況不同，很難直接關(guān)注蛋白質(zhì)的相互作用過程。而且，由于其串聯(lián)式的放大信號反應(yīng)，產(chǎn)生了高度靈敏的信號，只要在200nm范圍內(nèi)存在受體微珠(Acceptor beads)，就可以在520-620nm產(chǎn)生光信號，所以容易出現(xiàn)因微珠發(fā)生異?？拷a(chǎn)生的假陽性信號。

表面等離子共振法(surface plasmon resonance)在金屬表面固定一層受體分子(receptor),加在緩沖液中的配體(ligand)與固定的受體的反應(yīng)將導(dǎo)致譜峰發(fā)生可以觀測到的位移。通過分析共振角的改變，就可以得到分子間相互作用的信息。這些信息數(shù)據(jù)傳輸?shù)接?jì)算機(jī)上，通過分析可以實(shí)時(shí)、定量、靈敏地監(jiān)測到生物大分子的相互作用。但該方法需要使用專用的芯片，檢測成本較高，與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有時(shí)會存在差異。

表面增強(qiáng)拉曼光譜分析技術(shù)：光的散射是指光通過不均勻介質(zhì)時(shí)一部分光偏離原方向傳播的現(xiàn)象，偏離原方向的光稱為散射光。拉曼散射則是波長發(fā)生改變的散射光，即入射光與介質(zhì)的分子運(yùn)動(dòng)相互作用引起的頻率發(fā)生改變的散射。每種物質(zhì)都有自己特有的拉曼光譜，拉曼峰的位置和強(qiáng)度、拉曼譜線的數(shù)目直接與樣品分子振動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)能級有關(guān)。因此，與紅外吸收光譜類似，解析拉曼光譜也可以得到有關(guān)分子振動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)的信息進(jìn)而用于物質(zhì)定性、定量分析。但是拉曼散射是個(gè)非常弱的過程，散射光強(qiáng)僅約為入射光強(qiáng)的10^-10，得到的拉曼信號強(qiáng)度較低，故限制了拉曼散射的應(yīng)用和發(fā)展。

直到二十世紀(jì)七十年代科研工作者發(fā)現(xiàn)當(dāng)一些分子被吸附到某些粗糙的金屬(如銀、銅、金等)表面上時(shí)，它們的拉曼散射強(qiáng)度會增加10⁴～10⁶倍，這一現(xiàn)象被稱為表面增強(qiáng)拉曼散射(Surface-Enhanced Raman Spectroscopy，SERS)，這一技術(shù)解決了拉曼光譜信號強(qiáng)度低的問題，使超靈敏分析成為可能。但是，目前為止，并未有拉曼信號檢測技術(shù)應(yīng)用于小分子抑制劑的藥物篩選中。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種抑制劑的高通量篩選和捕獲方法，所述方法具有信號靈敏，并且極近距離觸發(fā)，可以排除大部分因微珠發(fā)生異?？拷a(chǎn)生的假陽性信號等優(yōu)勢。