[發(fā)明專(zhuān)利]抗H6N1禽流感病毒血凝素蛋白單克隆抗體ZJU61-01及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110237376.4
• 申請(qǐng)日: 2021-03-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112830966B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳海波;楊帆;吳南屏;姚航平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/10
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/10;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543;C12R1/91
• 代理公司: 杭州中成專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 朱瑩瑩

本發(fā)明提供抗H6N1禽流感病毒血凝素蛋白的單克隆抗體ZJU61?01及其應(yīng)用。單克隆抗體ZJU61?01抗體的重鏈氨基酸序列如SEQ ID No.2，輕鏈氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。對(duì)該單克隆抗體進(jìn)行進(jìn)一步的理化性狀分析和鑒定，并建立了以該單克隆抗體為探針通過(guò)膠體金免疫層析試紙條和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)H6亞型禽流感病毒的方法。本發(fā)明為臨床樣本中H6亞型禽流感病毒感染的輔助診斷提供了有效的工具，并可推廣應(yīng)用于多種檢測(cè)技術(shù)以及臨床和實(shí)驗(yàn)研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及抗H6N1禽流感病毒血凝素蛋白單克隆抗體ZJU61-01的制備及應(yīng)用，是利用細(xì)胞工程、抗體工程技術(shù)，獲得分泌抗血凝素蛋白的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系，通過(guò)同品系的小鼠誘導(dǎo)腹水，制備抗血凝素蛋白的單克隆抗體ZJU61-01，鑒定為IgG1、κ型，再通過(guò)親和純化、電泳、免疫等技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)該抗體的應(yīng)用。

背景技術(shù)

長(zhǎng)期流感病毒監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，在甲型禽流感病毒中，H6亞型禽流感病毒是最常分離到的，宿主范圍更廣泛，流行范圍也更廣。H6N1毒株已跨越種屬屏障，直接感染人，表明H6N1禽流感病毒的進(jìn)化和重組在不斷發(fā)生，給人類(lèi)公共衛(wèi)生安全造成潛在威脅。H6禽流感病毒參與了高致病性H5N1流感病毒的重配，說(shuō)明H6亞型禽流感病毒與其他亞型禽流感病毒的高重配率提高了病毒感染人的可能性。雖然H6亞型禽流感病毒目前為低致病性禽流感病毒，但其在禽類(lèi)廣泛流行，有反復(fù)感染豬和人并發(fā)生變異進(jìn)而演變成感染人類(lèi)的新型流感病毒的潛能。

目前H6亞型禽流感病毒感染的診斷方法主要包括病毒分離鑒定、血清學(xué)方法和分子生物學(xué)方法，如逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)。但是上述方法都需要特殊設(shè)備和條件，開(kāi)發(fā)一種快速、靈敏、廉價(jià)的H6亞型病毒檢測(cè)產(chǎn)品勢(shì)在必行，有利于促進(jìn)更早更廣泛的發(fā)現(xiàn)H6病毒感染，控制疫情擴(kuò)散。

基于以上背景，本項(xiàng)目選定H6亞型禽流感病毒血凝素蛋白為靶抗原，采用融合雜交瘤技術(shù)建立穩(wěn)定分泌抗血凝素蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系，并大量制備、純化和鑒定這些單克隆抗體。該單克隆抗體的成功獲得，為建立新型的H6亞型禽流感病毒診斷方法——基于免疫學(xué)技術(shù)的診斷奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。同時(shí)對(duì)疾病發(fā)病機(jī)理、預(yù)后及療效判定等方面的研究起到重要作用。

本發(fā)明用到雜交瘤細(xì)胞技術(shù)。該技術(shù)將免疫小鼠的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，以建立分泌均質(zhì)抗體的雜交瘤細(xì)胞系，也稱(chēng)為單克隆抗體技術(shù)。該技術(shù)涉及到動(dòng)物免疫、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、細(xì)胞克隆培養(yǎng)和免疫測(cè)定等一系列方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種抗H6N1禽流感病毒血凝素蛋白單克隆抗體，能識(shí)別H6N1禽流感病毒。該單克隆抗體亞型為IgG1、κ型，命名為ZJU61-01，能特異性識(shí)別禽流感病毒的血凝素蛋白。

抗體的重鏈氨基酸序列如SEQ ID No.2(DNA序列如SEQ ID No.1)，輕鏈氨基酸序列如SEQ ID No.4(DNA 序列如SEQ ID No.3)。

SEQ ID No.1

Heavy chain:DNA sequence(354bp)

Signal sequence-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4