[發明專利]一種殼聚糖酶及其突變體在制備殼寡糖中的應用

有效

• 申請號: 202110237365.6
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN112725315B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 鄭媛;盛軍;紀曉峰
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N15/56;C12N15/70;C12P19/26;C12P19/14
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 張中南

本發明提供一種殼聚糖酶突變體及其在制備殼寡糖中的應用，所提供的突變體相比于出發殼聚糖酶具有更好的溫度耐受性和pH值應用范圍，從而使提供的殼聚糖酶突變體能應用于實際生產。本發明首先提供一種殼聚糖酶，其氨基酸序列為SEQ ID NO:2；本發明再一個方面提供一種殼聚糖酶突變體，其氨基酸序列為SEQ ID NO:4。本發明的殼聚糖酶突變體與出發蛋白酶相比具有更高的溫度耐受性與更高的催化效率，具有更好的工業應用前景。

技術領域

本發明屬于功能基因改造技術領域，具體涉及一種殼聚糖酶及其突變體在制備殼寡糖中的應用。

背景技術

殼寡糖，又叫殼聚寡糖、低聚殼聚糖，是將殼聚糖經特殊的生物酶技術或化學降解、微波降解技術降解制備得到的一種聚合度在2～20之間寡糖產品，是水溶性較好、功能作用大、生物活性高的低分子量產品。其更低的分子量、更好的溶解性使得殼寡糖相較殼聚糖有著更為廣泛的應用。此外，殼寡糖還具備抗腫瘤、降血壓、增強免疫力等獨特的藥理功能活性，殼寡糖具有抑制植物病原菌的生長，誘導高等植物體內產生相關抗體等功能；報道還發現殼寡糖對動物腫瘤細胞也有抑制效果，這使得殼寡糖在醫藥、保健品、食品、養殖等領域有了更大的應用價值。

殼聚糖能被脂肪酶、蛋白酶、碳水化合物分解酶等多種酶水解；包括非專一性酶類：脂肪酶、蛋白酶、碳水化合物分解酶等，能將殼聚糖水解成聚合度低的殼寡糖。但是非專一性酶類水解到一定程度時，加大酶量也難以提高水解程度，而且水解產物較復雜、難以分離。

目前主要從細菌和真菌細胞中分離能夠制備殼寡糖的殼聚糖酶但從自然界分離的蛋白酶雖然存在降解殼聚糖制備殼寡糖的效果，但還存在降解效率低，難以實際應用的問題。

發明內容

本發明提供一種殼聚糖酶突變體及其在制備殼寡糖中的應用，所提供的突變體相比于出發殼聚糖酶具有更好的溫度耐受性和pH值應用范圍，從而使提供的殼聚糖酶突變體能應用于實際生產。

本發明首先提供一種殼聚糖酶，其氨基酸序列為SEQ ID NO:2；

用于編碼本發明的殼聚糖酶的核酸片段，其一種序列為SEQ ID NO:1。

本發明再一個方面提供一種殼聚糖酶突變體，其氨基酸序列為SEQ ID NO:4；

用于編碼上述殼聚糖酶突變體的核酸片段，其一種序列為SEQ ID NO:3。

本發明還提供一種重組表達載體，所述的重組表達載體上插入有上述的編碼殼聚糖酶突變體的核酸片段；

本發明的殼聚糖酶用于降解殼聚糖來制備殼寡糖。

本發明的殼聚糖酶突變體與出發蛋白酶相比具有更高的溫度耐受性與更高的催化效率，具有更好的工業應用前景。

附圖說明

圖1：菌株chi-19-03株的照片圖；

圖2：殼聚糖酶chiase1903的最適溫度檢測圖；

圖3：殼聚糖酶chiase1903的pH檢測圖。

具體實施方式

下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。在本發明中，若非特指，所采用的設備和原料等均可從市場購得或是本領域常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領域的常規方法。

實施例1：擴增原始殼聚糖酶基因

一、篩選殼聚糖酶產生菌