[發(fā)明專利]基于CRISPR技術(shù)進(jìn)行多重核酸檢測(cè)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110236947.2
• 申請(qǐng)日: 2021-03-03
• 公開（公告）號(hào): CN112795625B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁亞峰;孫潔;劉銳恒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東舜豐生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6816
• 分類號(hào): C12Q1/6816;C12Q1/6876
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 王正君;徐迅

1.一種非疾病診斷目的的檢測(cè)樣品中靶核酸的方法，所述方法包括將樣品與核酸檢測(cè)組合物接觸，所述核酸檢測(cè)組合物包括Cas蛋白、gRNA和單鏈核酸檢測(cè)器；所述gRNA包括與所述Cas蛋白結(jié)合的區(qū)域和與靶核酸上的靶序列雜交的導(dǎo)向序列；檢測(cè)由Cas蛋白切割單鏈核酸檢測(cè)器產(chǎn)生的可檢測(cè)信號(hào)，從而檢測(cè)靶核酸；

所述核酸檢測(cè)組合物為第一核酸檢測(cè)組合物；

所述第一核酸檢測(cè)組合物包括Cas12i，可以結(jié)合Cas12i以及與靶核酸上的第一靶序列雜交的第一gRNA，和第一單鏈核酸檢測(cè)器；

所述第一單鏈核酸檢測(cè)器的核酸為兩個(gè)連續(xù)的核苷酸，所述兩個(gè)連續(xù)的核苷酸為TT或CT，所述核苷酸為脫氧核糖核苷酸；

或者，所述第一單鏈核酸檢測(cè)器的核酸為兩個(gè)連續(xù)的核苷酸，所述兩個(gè)連續(xù)的核苷酸為TT或CT，所述兩個(gè)連續(xù)的核苷酸為2’-氟基修飾的核苷酸，所述核苷酸為脫氧核糖核苷酸。

2.一種非疾病診斷目的的對(duì)樣品中的靶核酸進(jìn)行雙重檢測(cè)的方法，所述方法包括將樣品與核酸檢測(cè)組合物接觸，所述核酸檢測(cè)組合物包括Cas蛋白、gRNA和單鏈核酸檢測(cè)器；所述gRNA包括與所述Cas蛋白結(jié)合的區(qū)域和與靶核酸上的靶序列雜交的導(dǎo)向序列；檢測(cè)由Cas蛋白切割單鏈核酸檢測(cè)器產(chǎn)生的可檢測(cè)信號(hào)，從而檢測(cè)靶核酸；

所述核酸檢測(cè)組合物包括第一核酸檢測(cè)組合物；

所述第一核酸檢測(cè)組合物包括Cas12i，可以結(jié)合Cas12i以及與靶核酸上的第一靶序列雜交的第一gRNA，和第一單鏈核酸檢測(cè)器；所述第一單鏈核酸檢測(cè)器的核酸為兩個(gè)連續(xù)的核苷酸，所述兩個(gè)連續(xù)的核苷酸為TT或CT，所述核苷酸為脫氧核糖核苷酸；或者，所述第一單鏈核酸檢測(cè)器的核酸為兩個(gè)連續(xù)的核苷酸，所述兩個(gè)連續(xù)的核苷酸為TT或CT，所述兩個(gè)連續(xù)的核苷酸為2’-氟基修飾的核苷酸，所述核苷酸為脫氧核糖核苷酸；

所述核酸檢測(cè)組合物還包括第二核酸檢測(cè)組合物、第三核酸檢測(cè)組合物和第四核酸檢測(cè)組合物中的任意一種；

所述第二核酸檢測(cè)組合物包括Cas12b，可以結(jié)合Cas12b以及與靶核酸上的第二靶序列雜交的第二gRNA，和第二單鏈核酸檢測(cè)器；

所述第三核酸檢測(cè)組合物包括Cas12a，可以結(jié)合Cas12a以及與靶核酸上的第三靶序列雜交的第三gRNA，和第三單鏈核酸檢測(cè)器；

所述第四核酸檢測(cè)組合物包括Cas12j，可以結(jié)合Cas12j以及與靶核酸上的第四靶序列雜交的第四gRNA，和第四單鏈核酸檢測(cè)器；

所述第二單鏈核酸檢測(cè)器為含有無堿基間隔物的單鏈核酸檢測(cè)器，所述含有無堿基間隔物的單鏈核酸檢測(cè)器含有1個(gè)任意的核苷酸和至少1個(gè)無堿基間隔物，所述核苷酸的兩端分別連接有至少1個(gè)無堿基間隔物；或者，所述第二單鏈核酸檢測(cè)器的核酸結(jié)構(gòu)為核酸類似物，所述核酸類似物為鎖核酸(LNA)；

所述第三單鏈核酸檢測(cè)器是含有無堿基間隔物的單鏈核酸檢測(cè)器，所述含有無堿基間隔物的單鏈核酸檢測(cè)器含有1個(gè)任意的核苷酸和至少1個(gè)無堿基間隔物，所述核苷酸的兩端分別連接有至少1個(gè)無堿基間隔物；

所述第四單鏈核酸檢測(cè)器為含有無堿基間隔物的單鏈核酸檢測(cè)器，所述含有無堿基間隔物的單鏈核酸檢測(cè)器含有1個(gè)任意的核苷酸和至少1個(gè)無堿基間隔物，所述核苷酸的兩端分別連接有至少1個(gè)無堿基間隔物；或者，所述第四單鏈核酸檢測(cè)器的核酸結(jié)構(gòu)為核酸類似物，所述核酸類似物為2’氧甲基RNA。