[發明專利]一種封閉試劑及利用其封閉免疫反應載體的方法

有效

• 申請號: 202110235565.8
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN113189324B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 譚玉華;梁天鋮;廖三川;邢曉敏;馮健明
• 申請（專利權）人: 廣州市豐華生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/569
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;周全英

本發明涉及免疫測定的技術領域，尤其涉及一種封閉試劑及利用其封閉免疫反應載體的方法。本發明的封閉試劑包含以下組分：磷酸鹽緩沖液、蛋白、糖、鹽類和防腐劑，所述磷酸鹽緩沖液中磷酸鹽的濃度為10～50mmol/L，pH為7.9±0.1。本發明的封閉試劑不僅能有效對免疫反應載體進行封閉，降低了本底，提高了分辨率、靈敏度、精密度和特異性，還能有效保護了免疫反應載體上抗原或抗體的生物活性，提高了熱穩定性和貨架期穩定性。該免疫反應載體的封閉方法能縮短封閉時間，進而縮短工期，有效控制了免疫反應的本底值，保證了靈敏度，并有效保護了免疫反應載體上抗原或抗體的活性，提高了免疫反應載體批內和批間的精密度。

技術領域

本發明涉及免疫測定的技術領域，尤其涉及一種封閉試劑及利用其封閉免疫反應載體的方法。

背景技術

免疫反應載體的封閉是繼抗原或抗體包被在載體上之后，再用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據的空隙，既往僅為了有效地控制本底或背景，采用封閉操作讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥在免疫反應其后的步驟中干擾物質的非特異再吸附。對于一步法試劑盒或間接法免疫測定中幾乎是不可缺的。

理想的封閉液應滿足以下條件：①抑制待測物質與固相載體表面的非特異性結合；②抑制非特異性蛋白-蛋白相互作用；③不與其后加入的試劑(抗體、蛋白A等)發生交叉反應；④能減少待測物質因相轉變而發生的蛋白變性或幫助其復性；⑤與酶及可影響測定結果的其他物質的反應性低；⑥不會引起特異性蛋白或活性分子與固相載體表面的脫結合；⑦與固相載體表面的結合牢固，批間重復性好。

傳統方法最常用的封閉試劑是0.05％～3.0％的牛血清白蛋白，或10％全血清(小牛血清、山羊血清等)，或1％～10％的明膠，或0.1％～5％的低(脫)脂奶粉，5％酪蛋白等。目前這些封閉試劑對免疫反應載體封閉后，仍有可能存在本底高，分辨率差，靈敏度低，精密度差，特異性差，載體上的抗原或抗體易失活，熱穩定性差，貨架期短等問題。特別是免疫反應載體封閉不當反而會使本底升高或者靈敏度降低。因此為了解決以上問題，需要一種優化的封閉試劑和免疫反應載體的封閉方法。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種封閉試劑及利用其封閉免疫反應載體的方法，本發明的封閉試劑不僅能有效對免疫反應載體進行封閉，降低了本底，提高了分辨率、靈敏度、精密度和特異性，還能有效保護了免疫反應載體上抗原或抗體的生物活性，提高了熱穩定性和貨架期穩定性。該免疫反應載體的封閉方法能縮短封閉時間，進而縮短工期，有效控制了免疫反應的本底值，保證了靈敏度，并有效保護了免疫反應載體上抗原或抗體的活性，提高了免疫反應載體批內和批間的精密度。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：提供一種封閉試劑，所述封閉試劑包含以下組分：磷酸鹽緩沖液、蛋白、糖、鹽類和防腐劑，所述磷酸鹽緩沖液中磷酸鹽的濃度為10～50mmol/L，pH為7.9±0.1。

優選的，所述磷酸鹽緩沖液中磷酸鹽的濃度為20mmol/L。

作為本發明所述的封閉試劑的優選實施方式，所述蛋白包括牛血清白蛋白、小牛血清、明膠、低脂奶粉、酪蛋白和蛋白胨中的至少一種。

作為本發明所述的封閉試劑的優選實施方式，所述蛋白胨包括骨肉(牛)蛋白胨、大豆蛋白胨、魚蛋白胨、胰蛋白胨中的至少一種。

優選的，所述胰蛋白胨為胰骨肉(牛)蛋白胨和胰酪蛋白胨中的至少一種。進一步的，優選胰酪蛋白胨，且胰酪蛋白胨中的氨基氮含量需≥3％，色氨酸含量需≥0.8％，胨含量需≥80％，其使用量為0.5％～10％，優選為1％。

作為本發明所述的封閉試劑的優選實施方式，所述糖包括葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖和山梨醇中的至少一種。