[發明專利]一種液基細胞檢查用細胞保存液及其制備方法

有效

• 申請號: 202110235221.7
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN113068683B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 夏煒
• 申請（專利權）人: 北京誠智光輝科技有限公司
• 主分類號: A01N1/00
• 分類號: A01N1/00;A01N1/02
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 孫銘偵

本申請涉及宮頸癌早期篩查的技術領域，具體公開了一種液基細胞檢查用細胞保存液及其制備方法。一種液基細胞檢查用細胞保存液包括溶質和溶劑，溶劑包括磷酸緩沖鹽溶液和細胞形態固定液，溶質包括黏液分解劑、紅細胞裂解劑和可抑制CDK1/CyclinB1復合體活化的細胞核形態固定劑；其制備方法為：制備磷酸緩沖鹽溶液，將磷酸緩沖鹽溶液調節至弱堿性后與細胞形態固定液混合，最后加入黏液分解劑、紅細胞裂解劑和細胞核形態固定劑進行混合。本申請公開的細胞保存液可用于LBC技術中的標本細胞的保存和處理，其具有維持細胞核形態結構的完整性并提高細胞核內物質的染色效果的優點。

技術領域

本申請涉及宮頸癌早期篩查的技術領域，更具體地說，它涉及一種液基細胞檢查用細胞保存液及其制備方法。

背景技術

宮頸癌是臨床婦科較為常見和多發的惡性腫瘤之一，也是導致婦女死亡率增加的重要疾病，其發病率僅次于乳腺癌，我國每年大約近3萬人死于宮頸癌，且我國宮頸癌病死患者數量呈逐年上升趨勢。可喜的是，宮頸癌是目前唯一病因明確的婦科惡性腫瘤，其與高危型人乳頭瘤病毒（HPV）的持續感染相關，因此宮頸癌的發生和發展均需要一個漸進的演變過程，該演變過程的持續時間可從數年到數十年，這說明早期的宮頸癌的發生與進展是可以得到控制的。對于宮頸癌患者而言，早期篩查與防治具有十分重要的意義，其能有效阻擋宮頸癌的演變，實現預防或及早治療宮頸癌的效果。

目前宮頸癌的早期篩查方法包括巴氏宮頸涂片法和液基細胞學（LBC）技術。巴氏宮頸涂片法是傳統的細胞學技術，最早由希臘醫師Papanicolaou在1941年提出，巴氏宮頸涂片法是一種操作方便、成本低廉的篩查方法，在過去的幾十年時間內，巴氏理論及技術的應用大大降低了宮頸癌的發病率和死亡率。LBC技術開創了現代細胞學篩查技術的先河，其通過改進細胞取樣和制片質量提高了宮頸病變的診斷準確性。由于巴氏宮頸涂片技術存在明顯的假陰性率，隨著現代社會的不斷發展，人們對診斷準確性的要求的逐步提高，LBC技術已逐漸取代巴氏宮頸涂片技術成為首選的宮頸癌早篩方法。

然而目前LBC技術仍存在諸多問題，一個普遍存在的問題是：制得的涂片上的標本細胞進行染色后的染色效果較差，從而提高了診斷難度與對診斷人員的技術要求。參照圖1和圖2，目前采用LBC技術制得的涂片上的標本細胞中的細胞核在染色時的染色效果較差，導致染色后的細胞核的顏色相對均勻，細胞核內的染色質無法較清晰地進行展示，使得醫師難以分辨病變細胞。

針對上述相關技術，發明人經過大量研究與實驗進行驗證后發現，保持細胞原有形態的完整性，特別是細胞核原有形態的完整性，是提高染色效果的關鍵因素。

發明內容

提供以下描述以幫助本領域技術人員理解本發明。

細胞核是真核細胞中最大的細胞器，高等動物和人類細胞的細胞核主要由核膜、染色質和核仁等組成，普遍認為維持細胞核形態和結構的完整性的關鍵在于維持核膜的完整性。

廣義的細胞核膜主要由外層核膜、內層核膜、核孔復合體和核纖層等部分組成。外層核膜與內質網相連，上面錨定著核糖體。在內外層核膜融合的區域內鑲嵌著超過60種蛋白組成的孔狀復合體。位于內層核膜下方的是核纖層，核纖層是一層類似網狀的結構，由核纖層蛋白組成，核纖層蛋白主要包括A型核纖層蛋白（lamin A）和B型核纖層蛋白（laminB），A型核纖層蛋白和B型核纖層蛋白通過頭尾聚合形成穩定的核骨架，以維持細胞核膜形態并定位核孔復合體。

在活細胞內，Aurora家族激酶和CDK1/CyclinB1復合體協同磷酸化核孔復合體Nup98，使核孔復合體Nup98解聚，之后位于細胞質內的CDK1/CyclinB1復合體和PKC家族激酶進入細胞核內并協同磷酸化lamin A和lamin B，促使核纖層解聚，從而破壞細胞核膜的形態與結構完整性。