[發明專利]一種液體菌劑及其制備方法

有效

• 申請號: 202110232040.9
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN112746048B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 張進武;郝祥蕊;丁千嶺;樊杰;張紅艷;馮鎮泰
• 申請（專利權）人: 上海農樂生物制品股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/27;A01P21/00;A01P3/00;C12R1/39
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發明涉及微生物發酵領域，特別是涉及一種液體菌劑及其制備方法，所述液體菌劑包括促生拮抗菌M18、所述發酵培養基和菌體保護劑；以發酵培養基的總體積為基準，所述發酵培養基中包括：葡萄糖0.8～1.2g/100ml，復合氨基酸0.6～1.4g/100ml，硫酸銨0.1～0.4g/100ml，硝酸鑭0.0015～0.0045g/100ml。所述制備方法包括以下步驟：1)配制所述發酵培養基；2)向所述發酵培養基中接種促生拮抗菌M18并培養；3)培養結束后向發酵液中加入菌體保護劑。本發明的液體菌劑可直接用于防治多種植物真菌性病害和促進植物幼苗的生長。優化后搖瓶發酵活菌產量可達350億CFU/ml以上，本發明的制備方法提高了促生拮抗菌M18的發酵水平和活菌穩定性；同時不產生廢水和廢渣。

技術領域

本發明涉及微生物發酵領域，特別是涉及一種液體菌劑及其制備方法。

背景技術

促生拮抗菌M18于植物根際土壤中分離得到，該菌類屬熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)，已保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號：CGMCC No.0462，在中國專利CN00119857.2中，發明人許煜泉、馮鎮泰描述了生物農藥促生拮抗菌M18及其制備方法，發明內容主要是：設計并應用了新的高效篩選培養程序，從植物根際土壤中制備出同時具有促進植物生長和廣譜性抑制植物真菌性病害的生物農藥促生拮抗菌M18；該發明產品能有效地抑制甜瓜蔓枯病菌、水稻紋枯病菌和黃瓜枯萎病菌等多種植物病菌的生長，并對植物幼苗的生長具有明顯的促進作用。該專利的描述被參考并結合于本文中。

在上述專利中，發明人還描述了將促生拮抗菌M18制成活菌制劑的方法，活菌數可達10¹⁰CFU/ml，保存6個月的活菌數仍能達到10⁸CFU/ml；具體制備過程是將該目標菌置于經高壓滅菌的培養基上，25～30度振蕩培養1～5天，得到促生拮抗菌M18，所述的培養基的配方為(重量百分比)：甘油0.5％～2.5％、蛋白胨1％～3％、磷酸氫二鉀0.01％～0.05％、硫酸鎂0.05％～0.35％、余量為水、pH5.5～7.5。該方法的缺點是M18菌劑活菌數偏低，儲存穩定性差。

目前利用促生拮抗菌M18于發酵罐中深層培養再經提取和純化，可以得到代謝產物吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid，簡稱PCA)，又稱申嗪霉素，是一種吩嗪類農用廣譜殺菌劑，把它制成懸浮劑或可濕性粉劑用于防治植物真菌性病害，該工藝的缺點是發酵后提取純化申嗪霉素的過程中會產生大量的廢水和廢渣，環保處置難度大。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種液體菌劑及其制備方法，用于解決現有技術中的問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明首先提供一種發酵培養基，以發酵培養基的總體積為基準，所述發酵培養基中包括以下組分：

本發明還提供一種液體菌劑，所述液體菌劑包括促生拮抗菌M18、所述發酵培養基和菌體保護劑。

本發明還提供一種液體制劑的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

1)配制所述發酵培養基；

2)向所述發酵培養基中接種促生拮抗菌M18并培養；

3)培養結束后向發酵液中加入菌體保護劑。

如上所述，本發明的液體菌劑及其制備方法，具有以下有益效果：液體菌劑可直接用于防治多種植物真菌性病害和促進植物幼苗的生長。優化后搖瓶發酵活菌產量可達350億CFU/ml以上，具有很大生產優勢。采用本發明的液體制劑的制備工藝，提高了促生拮抗菌M18的發酵水平和活菌穩定性；同時無提取和純化步驟，不產生廢水和廢渣，不需后續環保處置措施。

具體實施方式