[發(fā)明專利]一種二代測(cè)序捕獲探針的制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110231889.4 | 申請(qǐng)日： | 2021-03-02 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113004343A | 公開（公告）日： | 2021-06-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 雍金貴;劉宗文;占應(yīng)強(qiáng) | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 通用生物系統(tǒng)（安徽）有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C07H1/00 | 分類號(hào)： | C07H1/00;C07H1/06;C07H21/04;C12Q1/6806;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 合肥正則元起專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34160 | 代理人： | 劉生昕 |
| 地址： | 239000 安徽省滁*** | 國(guó)省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 二代 捕獲 探針 制備 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種二代測(cè)序捕獲探針的制備方法，通過固相亞磷酸酰胺三脂法將DNA固定在固相載體上，經(jīng)過脫保護(hù)、耦連、加帽、氧化四步循環(huán)反應(yīng)，逐步將若干個(gè)核苷酸單體依次連接上去，最終完成DNA鏈的合成，此法具有高效、快速偶聯(lián)、起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，該二代測(cè)序捕獲探針的制備方法實(shí)質(zhì)上是固態(tài)雜交法，又稱固相法，其本質(zhì)就是芯片，芯片上布滿了探針，其特點(diǎn)是DNA探針，探針長(zhǎng)度為50?105bp不等，其探針的密度和序列都可以認(rèn)為設(shè)置，相對(duì)而言，針對(duì)一個(gè)區(qū)段的探針密度越大，其捕獲成功率越高，解決了現(xiàn)在技術(shù)中，如何利用固相化學(xué)法制備二代測(cè)序捕獲探針，為二代測(cè)序研究提供了保障的問題。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種二代測(cè)序捕獲探針的制備方法。
背景技術(shù)
第二代DNA測(cè)序技術(shù)(簡(jiǎn)稱“二代測(cè)序”)又稱下一代測(cè)序技術(shù)，是對(duì)第一代測(cè)序技術(shù)的劃時(shí)代變革的核心。現(xiàn)有的技術(shù)平臺(tái)主要包括Roche/454 GS FLX、Illumina/Sol-exaGenomeAnalyzer、Helicos BioSciences公司的HeliScopeTMSingle Molecule Sequencer、美國(guó)Dana-her Motion公司推出的Polonator；以及連接法測(cè)序(sequencing byligation)，即通過引物來(lái)定位核酸信息，技術(shù)平臺(tái)有Applied Biosystems/SOLiDTMsystem。以上技術(shù)平臺(tái)所運(yùn)用的測(cè)序原理均為循環(huán)微陣列法。
雜交捕獲的原理是認(rèn)為設(shè)計(jì)探針，探針可以和目標(biāo)區(qū)段部分或者全部互補(bǔ)。探針會(huì)將目標(biāo)區(qū)段捕獲，未設(shè)計(jì)探針的區(qū)段會(huì)被洗脫丟棄，之后通過變性將探針和捕獲區(qū)段分開，倍捕獲的片段即可進(jìn)行二代測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建。
本發(fā)明中的一種二代測(cè)序捕獲探針的制備方法，實(shí)質(zhì)上是固態(tài)雜交法，又稱固相法，其本質(zhì)就是芯片，芯片上布滿了探針，其特點(diǎn)是DNA探針，探針長(zhǎng)度為50-105bp不等，其探針的密度和序列都可以認(rèn)為設(shè)置，相對(duì)而言，針對(duì)一個(gè)區(qū)段的探針密度越大，其捕獲成功率越高。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種二代測(cè)序捕獲探針的制備方法，解決現(xiàn)在技術(shù)中，如何利用固相化學(xué)法制備二代測(cè)序捕獲探針，為二代測(cè)序研究提供了保障的問題。
本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
一種二代測(cè)序捕獲探針的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：氨解處理；
步驟二：活化純化柱；
步驟三：純化；
步驟四：測(cè)量、質(zhì)譜檢測(cè)。
作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述氨解處理的具體過程如下：
S21、氨解前處理：向合成板的每孔中加入50μL的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的二乙胺，靜置10min，在轉(zhuǎn)速為4000r/min的條件下高速離心1min，之后再向每孔中加入50μL的體積分?jǐn)?shù)為10％的二乙胺，在轉(zhuǎn)速為4000r/min的條件下高速離心1min，然后用乙腈清洗2次，第2次清洗結(jié)束后在轉(zhuǎn)速為4000r/min的條件下高速離心1min；
S22、氨解：
S221、第一步氨解：取一塊新384板貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽數(shù)據(jù)與原板相同，置于合成板底層，向合成板的每孔中加入50μL冰氨水，之后用保鮮膜橫3層豎3層包裹，保證嚴(yán)密不漏氣，置于氨解鐵盒內(nèi)，之后將氨解鐵盒放置于溫度為45℃的烘箱中氨解1h；
S222：氨解結(jié)束取出冷卻，在轉(zhuǎn)速為4000r/min的條件下高速離心1min，之后取出放置于通風(fēng)櫥中，用剪刀剪去保鮮膜，再次向合成板的每孔中加入50μL的冰氨水，在轉(zhuǎn)速為4000r/min的條件下高速離心1min，取出，保留于收集板中；
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