[發明專利]一種絨毛組織原位載玻片培養法及染色體制備方法

在審

• 申請號: 202110229243.2
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN112903395A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 沈學萍;陽鑫妙;唐克峰
• 申請（專利權）人: 湖州市婦幼保健院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 沈濤

本發明屬于絨毛組織培養與檢測技術領域，具體公開了一種絨毛組織原位載玻片培養法及染色體制備方法。所述絨毛組織原位載玻片培養法包括前處理、消化、接種和培養步驟，成功在載玻片上原位培養了絨毛組織細胞，培養后載玻片可直接用來制備染色體，與現有的培養瓶法相比，無需通過胰酶消化或刮片轉移收獲細胞，簡化操作的同時避免了一些因為實驗操作引起的染色體丟失、細胞損耗等，為后續染色體制備提供優質原料。所述染色體制備方法以原位載玻片培養法為基礎，該方法將細胞丟失減少到最小程度，獲得的染色體分散性好，核型完整，有效提高核型分析的準確率。

技術領域

本發明屬于絨毛組織培養與檢測技術領域，具體涉及一種絨毛組織原位載玻片培養法及染色體制備方法。

背景技術

據統計，當前我國出生缺陷的發生率約4%~6%，每年有近百萬的缺陷兒出生。為了降低出生缺陷率，在胎兒疾病產前診斷中，主要是在中孕期、晚孕期采取羊膜腔穿刺術、臍靜脈穿刺術等方法進行檢查。這些方法因孕周較大，發現胎兒嚴重異常并終止妊娠的時間較晚，引產并發癥發生率較高，而且會對孕婦造成很大的生理及心理傷害。隨著醫療技術水平的發展，現在還可以在早孕期采取絨毛活檢術，絨毛活檢術是指在超聲引導下行穿刺術，取出胎盤內的絨毛組織進行染色體診斷，可以提早發現問題，降低傷害。

目前孕早期絨毛活檢術中獲得染色體的方法有絨毛細胞直接法和培養瓶法。絨毛細胞直接法即將新鮮取到的絨毛組織經清洗、去除其他組織并剪碎后直接制片染色獲得染色體的方法，它是利用絨毛組織細胞相對分裂旺盛的特點，但未經培養的細胞，獲得的染色體分裂相少，質量不高。而培養瓶法則是在無菌條件下，將絨毛組織清洗并剪碎后置于塑料材質的傳統斜口細胞培養瓶中，加入培養基后在CO₂培養箱中37℃培養數天，然后用胰酶或刮刀將貼壁生長的細胞處理成單個細胞懸液，將細胞懸液滴至載玻片后進行制片染色，獲得染色體。培養瓶法較絨毛細胞直接法質量好，數量多，但在收細胞過程中，采用胰酶消化法或刮片法，細胞損耗大、完整染色體核型少、核型分析的準確率下降。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種絨毛組織細胞原位載玻片培養法，直接在載玻片上培養絨毛細胞，細胞分裂相多，形態好，貼壁性好；培養后載玻片可直接制片染色獲得染色體，無需經過胰酶消化或刮片過程，有效減少細胞損耗，提高后續核型分析的準確率。

為達到上述目的，本發明采用的具體技術方案如下：

一種絨毛組織細胞原位載玻片培養法，包括以下步驟：

①前處理：無菌條件下取絨毛組織樣本，對其進行沖洗，直至無可見血紅色，剔除其他組織后加入雙抗溶液（即青鏈霉素混合液），然后在二氧化碳培養箱中36-38℃溫育0.5-1.5小時；

②消化：將絨毛組織樣本剪碎，離心棄上清；再加入胎牛血清培養基洗滌，離心棄上清；然后加入組織消化液，在二氧化碳培養箱中36-38℃溫育0.5-1.5小時；

③接種：將消化后樣本離心，棄上清；加入胎牛血清培養基洗滌，離心棄上清；再加入胎牛血清培養基，混勻得到懸液，吸取懸液加至原位培養盒內的載玻片上，將原位培養盒平置于二氧化碳培養箱于36-38℃進行預培養；

④培養：預培養20-25h后在原位培養盒中加入胎牛血清培養基，培養20-25h后進行換液；培養20-25h后再次換液，再培養20-25h，得到具有絨毛細胞的載玻片。

優選的，步驟①中，所述絨毛組織樣本為至少10mg的絨毛分枝樣本。

優選的，步驟①中，絨毛組織樣本用無菌生理鹽水沖洗。

優選的，步驟②中，所述組織消化液為胰蛋白酶溶液或者膠原酶Ⅱ溶液。