[發明專利]瑞香狼毒根際土壤和根內化感物質的提取和含量檢測方法

有效

• 申請號: 202110229231.X
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN112903876B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 金輝;秦波;程濟南;楊曉燕;柳皓月;許欣欣;閔燈
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘭州化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/14;G01N30/02
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 曹向東

1.瑞香狼毒根際土壤和根內化感物質的提取和含量檢測方法，包括以下步驟：

⑴向瑞香狼毒根際土壤樣品中按照每100g土樣加入不少于300mL的甲醇溶液，超聲提取不少于30min，重復三次；經抽濾除雜后，獲得粗提溶液A；所述粗提溶液A使用旋轉蒸發儀除去甲醇后，即得化感物質粗提物B；

⑵稱取50g瑞香狼毒植株的根部，通過粉樣機粉碎后加入150mL甲醇，超聲提取30min，重復三次，得到粗提溶液E；所述粗提溶液E通過使用旋轉蒸發儀除去甲醇后，即得化感物質粗提物F；

⑶分別稱取5~10mg所述化感物質粗提物B、所述化感物質粗提物F，分別加入色譜級甲醇溶液，配制成2mg/mL的溶液，并通過0.22μm的有機濾膜除去雜質，分別得到待測溶液C、待測溶液D；所述化感物質粗提物B與所述化感物質粗提物F中包含下述7種化感物質：傘形花內脂、狼毒色原酮、西瑞香素、異新狼毒素A、新狼毒素B、二氫瑞香素B、7-甲氧基新狼毒素A；

⑷首先采用高效液相色譜分別建立傘形花內脂、狼毒色原酮、西瑞香素、異新狼毒素A、新狼毒素B、二氫瑞香素B以及7-甲氧基新狼毒素A共計七種瑞香狼毒化感物質的標準曲線；然后采用高效液相色譜（HPLC）分別對待測溶液C、待測溶液D進行檢測，通過外標法確定化感物質保留時間；最后，將化感物質含量通過比對化感物質標準曲線峰面進行換算即得；所述高效液相色譜的色譜條件如下：色譜柱：250 mm×4.6 mm、5μm粒徑的Symmetry C18反相柱；流動相流速：1mL/min；流動相：A相為乙腈，B相為含0.2%乙酸的水；進樣量：20μL；洗脫梯度：0~6min：20%~30% A；6~8min：30%~35% A；8~15min：35~45% A；15~18min：45~60% A；18~20min：60~80% A；20~25min：80% A。