[發明專利]一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C19基因多態性的試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202110228752.3
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN112852933A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 陳龍;陳大為;張瑤
• 申請（專利權）人: 濟南國益生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 濟南信在專利代理事務所(特殊普通合伙) 37271
• 代理人: 殷盛江

1.一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C19基因多態性的引物探針組，其特征在于，所述引物和探針組分為兩組，A組為檢測CYP2C19*2和CYP2C19*3的引物對、野生型探針和突變型探針；B組為檢測CYP2C19*17的引物對、野生型探針和突變型探針；其中，A組的CYP2C19*2引物和探針序列為：

正向引物：5’-AGCATTACTCCTTGACCTGTTAAACATCCGTAG-3’；

反向引物：5’-CAACCAGAGCTTGGCATATTGTATCTATACCT-3’；

野生型探針：

5’-CAAGGTTTTTAAGTAATTTGTTATGGGT(FAM-dT)CCCGGGAAA(THF)AA(BHQ1-dT)CAATGATAGT(C3spacer)-3’；

突變型探針：

5’-CAAGGTTTTTAAGTAATTTGTTATGGGT(HEX-dT)CCTGGGAAA(THF)AA(BHQ1-dT)CAATGATAGT(C3spacer)-3’；

A組的CYP2C19*3引物和探針序列為：

正向引物：5’-ATCATTTAGCTTCACCCTGTGATCCCACTTTC-3’；

反向引物：5’-CATGGCTGTCTAGGCAAGACTGTAGTATTCAA-3’；

野生型探針：

5’-TGAAAACATCAGGATTGTAAGCACCCCC(ROX-dT)GGA(THF)CCAGG(BHQ2-dT)AAGGCCAAGT(C3spacer)-3’；

突變型探針：

5’-TGAAAACATCAGGATTGTAAGCACCCCC(CY5-dT)GAA(THF)CCAGG(BHQ2-dT)AAGGCCAAGT(C3spacer)-3’。

B組CYP2C19*17的引物和探針序列為：

正向引物：5’-AGTTTCTCAAGCCCTTAGCACCAAATTCTCTG-3’；

反向引物：5’-GAACTGGGATTTGAGCTGAGGTCTTCTGATG-3’；

野生型探針：

5’-AATTTGTGTCTTCTGTTC(FAM-dT)CAAAGCA(THF)C(BHQ1-dT)CTGATGTAAGAGATA(C3spacer)-3’；

突變型探針：

5’-AATTTGTGTCTTCTGTTC(HEX-dT)CAAAGAA(THF)C(BHQ1-dT)CTGATGTAAGAGATA(C3spacer)-3’。

2.如權利要求1所述的一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C19基因多態性的引物探針組，其特征在于，所述探針修飾有熒光基團和猝滅基團，所述猝滅基團修飾在THF 3’端的T堿基上，熒光基團修飾在SNP位點的5’端T堿基上或SNP位點互補堿基的5’端T堿基上。

3.如權利要求2所述的一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C19基因多態性的引物探針組，其特征在于，所述熒光基團用FAM、HEX、ROX或CY5修飾，所述淬滅基團用BHQ1、BHQ2修飾。

4.如權利要求3所述的一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C19基因多態性的引物探針組，其特征在于，所述探針3’末端標記阻抑聚合酶延伸或擴增的修飾基團；所述探針覆蓋SNP位點，在探針的SNP位點上做鎖核酸(LNA)修飾。

5.如權利要求4所述的一種基于鎖核酸修飾的RMA法檢測CYP2C19基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括含擴增反應試劑A的檢測管、含擴增反應試劑B的檢測管、緩沖液、醋酸鎂、陽性對照、陰性對照。