[發(fā)明專利]應(yīng)用于肺腺癌細胞亞群的一組qRT-PCR內(nèi)參基因及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110228229.0
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN112760383B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁嘉琪;卞赟藝;隋啟海;陳振淙;黃宜煒;金星;詹成;王群
• 申請（專利權(quán)）人: 上海歐易生物醫(yī)學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 徐俊

本發(fā)明公開了應(yīng)用于肺腺癌細胞亞群的一組qRT?PCR內(nèi)參基因及其應(yīng)用，屬于基因檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的內(nèi)參基因選自基因RPL41、TPT1、RPL34、RPS29、RPL27A、HLA?B、SERF2、RPS13和RPL7中的至少一種。本發(fā)明的內(nèi)參基因相較于多數(shù)目前研究中常用的內(nèi)參基因表達更加穩(wěn)定，更加適用于從肺腺癌中分選出的腫瘤細胞和正常細胞，通過qRT?PCR檢測肺腺癌不同細胞亞群的基因的表達量，以獲得更加可靠的標準化定量結(jié)果，從而為在復(fù)雜生理病理背景中探索腫瘤疾病的病因、肺腺癌的治療和預(yù)后提供精確且可靠的數(shù)據(jù)支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及應(yīng)用于肺腺癌細胞亞群的一組qRT-PCR內(nèi)參基因及其應(yīng)用，屬于基因檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

腫瘤細胞是基因組不穩(wěn)定性和特定生理及病理環(huán)境中進化的復(fù)雜細胞群體，從時間維度上看，細胞間高度的異質(zhì)性導(dǎo)致了不同組織來源腫瘤細胞的差異和不同患者同類癌癥細胞群之間的差異。腫瘤在空間維度上還是作為存在的所有細胞的混合物進行研究的，即同一個腫瘤樣本中的細胞組分并不都是癌性的。因此應(yīng)用特定的分離技術(shù)例如流式細胞分選方法從腫瘤混合樣本中獲得特定細胞亞群，再通過檢測不同細胞亞群的某些參數(shù)值，可以為在復(fù)雜生理病理背景中發(fā)現(xiàn)腫瘤疾病的病因、治療和預(yù)后提供精確且可靠的理論基礎(chǔ)。

反轉(zhuǎn)錄實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(reverse?quantitative?real-timepolymerase?chain?reaction,qRT-PCR)是一種實時監(jiān)控核酸擴增的技術(shù)，可以實現(xiàn)對初始模板的定量分析，并且具有對靶基因定量準、特異性強、靈敏度高等特征，是目前研究基因表達分析中的首選應(yīng)用技術(shù)。因此將qRT-PCR技術(shù)應(yīng)用在分選出的特定細胞亞群中，便可以檢測該種細胞亞群中某些特定基因的表達量，從而進一步揭示腫瘤樣本中各種細胞的遺傳學背景和細胞與細胞間豐富的腫瘤生態(tài)系統(tǒng)。

值得注意的是，在qRT-PCR技術(shù)對靶基因定量的結(jié)果分析過程中，內(nèi)參基因的表達量至關(guān)重要。檢測內(nèi)參基因的表達量可用于校正由于靶基因的含量和質(zhì)量、反應(yīng)效率和實驗操作等因素而產(chǎn)生的誤差，從而使得qRT-PCR技術(shù)得到的半定量的結(jié)果可信度更高。理想的內(nèi)參基因即表達水平不受研究條件變化的影響并且可以在不同樣本中恒定表達的參照基因。然而目前可作為內(nèi)參基因的基因種類雖然較多，并且這些內(nèi)參基因在相同種類的組織中表達量相對穩(wěn)定，但是它們在不同種類的組織中的表達量仍會有所差異。因此目前內(nèi)參基因的選擇仍主要依據(jù)傳統(tǒng)經(jīng)驗，而且也沒有特定的內(nèi)參基因可以用于在采用各種方法分選出的細胞亞群的研究中對qRT-PCR定量結(jié)果進行校正。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是：目前內(nèi)參基因的選擇仍主要依據(jù)傳統(tǒng)經(jīng)驗，而且也沒有特定的內(nèi)參基因可以用于從肺腺癌中分選出的細胞亞群的qRT-PCR的定量結(jié)果進行校正。

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了應(yīng)用于肺腺癌細胞亞群的一組qRT-PCR內(nèi)參基因，其特征在于，選自基因RPL41、TPT1、RPL34、RPS29、RPL27A、HLA-B、SERF2、RPS13和RPL7中的至少一種。

優(yōu)選地，所述內(nèi)參基因選自基因RPL41或RPL41與TPT1、RPL34、RPS29、RPL27A、HLA-B、SERF2、RPS13和RPL7中的至少一種的組合。

本發(fā)明還提供了一種上述應(yīng)用于肺腺癌細胞亞群的一組qRT-PCR內(nèi)參基因標準化定量的方法，包括如下步驟：

步驟1：檢測樣本中待測基因和內(nèi)參基因的絕對濃度；

步驟2：將待測基因的絕對濃度與內(nèi)參基因的絕對濃度進行比較，以獲得待測基因的相對濃度。

優(yōu)選地，所述步驟1中的樣本為從肺腺癌組織中分選出的腫瘤細胞和/或正常細胞。

本發(fā)明還提供了上述應(yīng)用于肺腺癌細胞亞群的一組qRT-PCR內(nèi)參基因在制備檢測基因的試劑盒中的應(yīng)用。