[發明專利]一種DUF642蛋白單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 202110228003.0
• 申請日: 2021-03-02
• 公開（公告）號: CN113024668B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 張穎;劉銳濤;劉崇懷;樊秀彩;姜建福;孫磊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院鄭州果樹研究所
• 主分類號: C07K16/16
• 分類號: C07K16/16;C07K14/415;C12N15/29;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發明提供了一種DUF642蛋白的單克隆抗體及其應用。本發明的DUF642的單克隆抗體，對DUF642蛋白具有高親和力和高特異性，能廣泛地用于DUF642檢測上，特別可用于檢測市售各品種葡萄中DUF642蛋白的表達情況。此外，本發明的單克隆抗體提供了一個靶向蛋白研究的工具，使得對不同敗育品種葡萄中DUF642蛋白的表達與最終葡萄有無核的形成之間的調控關系能夠有效地研究。

技術領域

本發明涉及雜交瘤細胞系及其產生的單克隆抗體與應用，特別是涉及針對細胞壁合成相關蛋白DUF642單克隆抗體和分泌該抗體的雜交瘤細胞系以及該抗體的應用。

背景技術

細胞壁DUF642蛋白家族，是植物中高度保守的可能與果膠結構修飾相關的蛋白。DUF642蛋白家族能夠參與植物細胞壁理化上的修飾、發育或環境信號的響應。其在植物生長發育中發揮作用同時又在植物逆境時響應脅迫,例如干旱、鹽、酸鋁下起著重要作用。

根據之前的研究發現，在葡萄種子發育過程中，DUF642基因的表達與最終是否形成可繁育的種子之間具有明確的調控關系，即DUF642基因的表達與否，決定了葡萄的敗育現象。目前市場中，大量出售的葡萄品種中，一部分是自然選育出來的天然敗育品種，一部分是經過人工誘導的無核品種。

目前市面上并沒有專門針對葡萄DUF642基因的抗體，因此在蛋白檢測層面上，對于該研究領域缺乏有效的抗體工具，用于葡萄敗育的基礎研究，以及市售無核品種的葡萄在蛋白層面的檢測。

發明內容

本發明的目的是提供能與DUF642蛋白專一結合的單克隆抗體，以解決現有技術存在的上述缺陷，本發明通過提供一個靶向蛋白研究的工具，使得對市售的不同品種葡萄中的DUF642蛋白的表達變化及蛋白網絡圖譜可以實現更深層次研究。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

本發明通過合成表達DUF642的全長重組蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，以其作為免疫原，免疫小鼠得到淋巴細胞，并利用雜交瘤細胞融合技術制得融合細胞，經免疫印跡法、有限稀釋法和ELISA法，得到能夠產出高親和性和高特異性的單克隆抗體的細胞株，及由該細胞株分泌的單克隆抗體，并經免疫酶聯，蛋白印記，免疫共沉淀加質譜和抗體芯片檢測等驗證，確定最有效抗體。

本發明獲得的單克隆抗體具有如下結構：所述DUF642單克隆抗體的重鏈可變區的CDR1氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，重鏈可變區的CDR2氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，重鏈可變區的CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO:4 所示；輕鏈可變區的CDR1氨基酸序列如SEQID NO:5所示，輕鏈可變區的 CDR2氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，輕鏈可變區的CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

本發明還提供了所述單克隆抗體在制備檢測DUF642蛋白的試劑盒中的應用。

優選地，所述試劑盒為檢測DUF642蛋白的ELISA試劑盒，所述試劑盒是所述單克隆抗體作為包被抗體。

本發明還提供一種葡萄敗育相關蛋白，所述蛋白由DUF642基因表達。本發明通過大量實驗研究發現，DUF642蛋白的表達水平在葡萄的無核品種與有核品種中有顯著差異，且，在經過敗育處理的有核品種葡萄中，DUF642蛋白的表達水平顯著提高。因此，表明該蛋白的表達與敗育品種具有密切聯系，可通過調節該蛋白的表達水平實現葡萄有無核形成之間的調控。

本發明還提供了所述的DUF642蛋白的單克隆抗體在制備檢測葡萄有無核形成的試劑盒中的應用。由于DUF642蛋白能作為區別葡萄的無核品種與有核品種，因此，本發明的單克隆抗體也能用于檢測無核品種與有核品種中的 DUF642蛋白。

本發明還提供了所述的DUF642蛋白的單克隆抗體在制備檢測葡萄敗育的試劑盒中的應用。由于DUF642蛋白的表達與敗育現象具有密切聯系，因此，本發明的單克隆抗體也能用于檢測葡萄是否出現敗育現象。