[發明專利]一種干細胞濾液及干細胞因子混合液的制備方法在審
| 申請號： | 202110227036.3 | 申請日： | 2021-03-02 |
| 公開（公告）號： | CN113069407A | 公開（公告）日： | 2021-07-06 |
| 發明（設計）人： | 劉廣成;葉玲玲;王堅強;潘魁魁;金啟凡 | 申請（專利權）人： | 寧波思成生物科技有限公司 |
| 主分類號： | A61K8/99 | 分類號： | A61K8/99;A61Q19/00;A61Q19/08;C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京權智天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11638 | 代理人： | 徐小淇 |
| 地址： | 315000 浙江省寧*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 干細胞 濾液 因子 混合液 制備 方法 | ||
1.一種干細胞濾液及干細胞因子混合液的制備方法，其特征在于：干細胞濾液及干細胞因子混合液的制備方法步驟如下：
步驟1：采用的人臍帶來源供體無病原體(病毒、支原體、衣原體等)感染；
步驟2：采用無血清、無動物源成分的基礎培養基和添加因子進行臍帶間充質干細胞的種子細胞及產品細胞制備；
步驟3：采用P4-P6代種子細胞，在培養箱進行間充質干細胞擴增培養，待融合度達到100％時抽出含有細胞因子的培養液；
步驟4：把步驟3的培養液置于離心機中離心，把上清部分轉移到新的無菌離心管中，放到溫度為4℃冰箱保存；
步驟5：在步驟3已取出上清液的培養瓶/皿中加入適量生理鹽水，在培養箱中繼續培養細胞24h；
步驟6：通過步驟5的處理，細胞全部懸浮起來。把懸浮起來的細胞以及生理鹽水抽到離心管中；
步驟7：把步驟6中裝有細胞懸液的離心管放入液氮中冷凍，然后溶解；
步驟8：把步驟7中離心管中的細胞懸液充分吹打，盡量使粘附在細胞膜上的細胞器脫落；
步驟9：再重復一次步驟7、步驟8的操作；
步驟10：把步驟9中裝有破碎細胞的混合液置于離心機中離心；
步驟11：把步驟10中離心管中的上清液取出，加入到步驟3中的培養液當中；
步驟12：把步驟11中的混合液充分混合后，按每份5ml的體積分裝到可密封的無菌容器當中；
步驟13：將步驟12中裝有混合液的容器密封后，凍于-20℃以下的冰箱中；
步驟14：將步驟13中的產品溶解后，用于無針水光導入。
2.根據權利要求1所述的一種干細胞濾液及干細胞因子混合液的制備方法，其特征在于：使用的混合液為干細胞因子和以及產生干細胞因子的細胞濾液混合物。
3.根據權利要求1所述的一種干細胞濾液及干細胞因子混合液的制備方法，其特征在于：所述步驟3和所述步驟5中培養箱的培養條件均為溫度37℃，CO2濃度為5％。
4.根據權利要求1所述的一種干細胞濾液及干細胞因子混合液的制備方法，其特征在于：所述步驟7中得到裝有細胞懸液的離心管的凍存溫度為-196℃，溶化溫度為25℃。
5.根據權利要求1所述的一種干細胞濾液及干細胞因子混合液的制備方法，其特征在于：所述步驟4和所述步驟10中離心機轉速均為2000rpm，時間為10min。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于寧波思成生物科技有限公司，未經寧波思成生物科技有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202110227036.3/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
