[發明專利]定量檢測末梢血樣本中脂溶維生素含量的方法

在審

• 申請號: 202110226116.7
• 申請日: 2021-03-01
• 公開（公告）號: CN113075305A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 劉鵬云;劉妍妍;馬金飛;劉華芬
• 申請（專利權）人: 杭州凱萊譜精準醫療檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 杭州宇信知識產權代理事務所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟

本發明涉及一種定量檢測血漿樣本中抗病毒藥物含量的方法，所述方法包括如下步驟：(1)采集微量末梢血；(2)將末梢血全血樣本與含有內標的蛋白沉淀液混合，渦旋后離心，將上清液稀釋得到待檢測液；(3)采用高效液相色譜串聯質譜系統對待檢測液進行檢測和分析。本發明提供了一種同時檢測末梢血樣本中維生素A、維生素D2、維生素D3及維生素E的方法，前處理簡單，檢測成本低，檢測效率高。

技術領域

本發明涉及檢測技術領域，主要涉及一種定量檢測末梢血樣本中脂溶性維生素含量的方法。

背景技術

脂溶性維生素是指易溶于有機溶劑而不溶于水的一類維生素，主要包括維生素A、維生素D和維生素E等。該類維生素能溶解于脂肪，不易被排泄，可儲存于體內，對于人體的代謝和機能起著非常重要、不可或缺的作用。維生素A、 D、E分別以酶和輔基激活劑的形式參與蛋白質、酶、激素和維生素的合成、分解與轉化，影響人體生長發育、新陳代謝、免疫調節等生理活動。因此，將機體脂溶性維生素水平保持在適宜范圍非常重要，A、D、E缺乏可引起多種疾病，而過量攝入又會導致中毒。

目前，臨床上檢測多種脂溶性維生素(包括維生素A、維生素D3、維生素 D2以及維生素E等)的方法主要包括免疫法、電化學法、色譜法以及液相色譜串聯質譜法等，主流的脂溶性維生素檢測樣本類型為血清，檢測所需血樣量相對較多，但是由于嬰幼兒特別是新生兒群體存在采血不便的情況，難以分離足量血清進行檢測。但脂溶性維生素缺乏為小兒常見病，因此微量末梢血全血的脂溶性維生素檢測項目具有非常重要的意義，但針對末梢血全血脂溶性維生素檢測的文獻及專利較少。

CN110488008A及CN 110488004A中分別公布了檢測末梢血25-羥基維生素 D3及末梢血25-羥基維生素D的試劑盒及其制備方法和應用，這兩種試劑盒分別包括25羥基維生素D3免疫層析檢測卡和釋放劑以及25羥基維生素D免疫層析檢測卡和釋放劑，所述免疫層析檢測卡包括試紙條，所述試紙條包括檢測線及質控線，所述檢測線上包被有25-羥基維生素D3或25-羥基維生素D完全抗原，所述質控線上包被有羊抗兔多克隆抗體。這兩種方法的缺點在于僅能檢測末梢血中的25-羥基維生素D3或25-羥基維生素D，未能對其它種類的脂溶性維生素進行檢測。

CN108802221A中公布了一種末梢血中維生素A和維生素E的微量檢測方法，其檢測步驟包括：1.末梢血樣品加入含有內標及BHT的甲醇溶液，完成蛋白沉淀；2.加入特丁基甲醚進行液液萃取，室溫下氮氣吹干萃取上清液，并加入 80％甲醇復溶，渦旋震蕩后離心得到待測樣本；3.以超高效液相色譜串聯質譜檢測：通過超高效液相色譜串聯質譜檢測獲得所述待測樣本中待測物的峰面積和對應內標峰面積，完成微量末梢血樣本中維生素A和維生素E的檢測。CN 110208435A中公布了同時檢測人末梢血中25-羥基維生素D3和25-羥基維生素 D2含量的方法，其步驟與CN108802221A中公布的樣本前處理及檢測步驟比較類似，但是所使用試劑的種類不同：1.末梢血樣品加入含有內標的乙醇溶液，進行蛋白沉淀；2.加入正己烷進行液液萃取，室溫下氮氣吹干萃取上清液，并加入含甲酸的甲醇水復合溶液，渦旋震蕩后離心得到待測樣本；3.以高效液相色譜串聯質譜檢測完成微量末梢血樣本中維生素D2和維生素D3的檢測。這兩種檢測方法只能同批檢測脂溶維生素D2和維生素D3，且前處理步驟非常復雜，耗時耗力并且難以實現高通量自動化操作。