[發明專利]采用高效液相色譜法測定神經酸含量的方法

在審

• 申請號: 202110224497.5
• 申請日: 2021-03-01
• 公開（公告）號: CN112730707A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 代玉玲;王海云;朱常成;謝富蘭;李加靖;席亮;廖榮
• 申請（專利權）人: 云南自由貿易試驗區睿之成醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司 53114
• 代理人: 董昆生

本發明涉及分析化學技術領域，具體公開一種采用高效液相色譜法測定神經酸含量的方法，包括以下步驟：取神經酸標準品、含有神經酸的待測樣品，以甲醇為溶劑，超聲1～5分鐘；色譜條件為：采用C₁₈色譜柱，以0.01 mol/L磷酸二氫鉀?甲醇為流動相等度洗脫，本發明針對現有技術改變了流動相的參數，并采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱填料，經測試后峰高和峰面積沒有無顯著影響，但極大的縮短了出峰的時間，使得測試速度加快，效率提升。

技術領域

本發明涉及分析化學技術領域，具體涉及一種采用高效液相色譜法測定神經酸含量的方法。

背景技術

神經酸化學名為順-15-二十四碳單烯酸，分子式為C₂₄H₄₆O₂，相對分子量為366 .6。在常溫下，神經酸為白色片狀晶體，能溶于醇，不溶于水，熔點為39～40℃。

目前多采用衍生化氣相色譜法來測定神經酸的含量。采用衍生化氣相色譜法，首先需要將神經酸進行酯化后測定酯化物的含量，該方法前處理過程繁瑣，且難以判斷酯化終點，檢測結果的可信度不高。也有使用高效液相色譜法測定神經酸含量的現有技術，但依舊存在檢測時間長，效率不高等問題，因此，亟需開發一種樣品前處理簡單，測定結果準確度高的神經酸含量測定方法。

發明內容

為了解決背景技術中描述的技術問題，本發明提供了一種采用高效液相色譜法測定神經酸含量的方法，選擇甲醇為溶解和提取溶劑，采用C₁₈色譜柱，選擇0.01 mol/L 磷酸二氫鉀-甲醇為流動相等度洗脫，實現了神經酸的含量快速、準確定量分析。

本發明解決背景技術中的技術問題，通過以下具體技術方案來實現：

一種采用高效液相色譜法測定神經酸含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）取神經酸標準品、含有神經酸的待測樣品，以甲醇為溶劑，超聲1～5分鐘；

（2）色譜條件為：采用C18色譜柱，以0.01 mol/L 磷酸二氫鉀-甲醇為流動相等度洗脫。

優選的，采用的色譜柱填料具體為十八烷基硅烷鍵合硅膠。

優選的，所述流動相0.01 mol/L 磷酸二氫鉀-甲醇的體積比為5～15：85～95。

優選的，所述流動相0.01 mol/L 磷酸二氫鉀-甲醇的體積比為5:95。

優選的，檢測波長在198nm～213nm之間。

優選的，檢測的波長為210nm。

優選的，待分析標準品或樣品的進樣質量按C₂₄H₄₆O₂計為2微克～70微克。

優選的，分析流速為0.6 ml/min～1.5ml/min。

優選的，檢測溫度在20 ℃～30℃。

本發明方法色譜柱使用的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，與CN109682900A中的色譜柱填料（辛烷基硅烷鍵合硅膠），提取溶劑、流動相組成有較大差異，屬于在原理上本質不同的兩種分析方法，通過與現有技術高效液相色譜法測定蒜頭果油分離出的神經酸含量（賴福兵，李偉光等），蒜頭果光合生理以及其種子中神經酸的提取純化（付一笑） ，響應面優化超聲輔助蒜頭果中神經酸提取工藝及其HPLC分析（谷穎卓）中的高效液相色譜法測定神經酸的技術方案相對比，本發明創造性的僅使用了0.01mol/L 磷酸二氫鉀與甲醇兩個試劑組成的流動相，本發明方法檢測時間約為8～15分鐘，分析時間優于現有技術甲醇－乙腈－四氫呋喃－0.4%乙酸水溶液10:80:5:5流動相的18分鐘，試劑組成得到的效果優于現有技術甲醇－乙腈－四氫呋喃－0.4%乙酸水溶液。

附圖說明

圖1 本發明方法實施例5神經酸標準品色譜圖；